【文档说明】甾体激素类药物的分析课件.ppt，共(42)页，1.058 MB，由小橙橙上传

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甾体激素类药物的分析课件学习要点：1、掌握本章药物的结构特征与分类方法和分析方法的关系2、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法、Kober比色法。3、熟悉本类药物的红外光谱鉴别法和杂质“其他甾体”的检查方法4、熟悉本类药物的其他含量测定方法。•第一节基本结构与分类：CC23456

7AB189101112131415161718192021CD•1、肾上腺皮质激素：可的松、泼尼松、地塞米松皮质酮CCH2OHOHOOOH•2、雄性激素及蛋白同化激素：睾酮、甲睾酮、十一酸睾酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙睾酮OHO•OO

COCH2CH2C6H5苯丙酸诺龙•3、孕激素：黄体酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮等COCH3O•4、雌激素：雌二醇、炔雌醇雌二醇OHOH•HOCOHCH炔雌醇•5、口服避孕药：炔诺酮、炔诺孕酮、炔孕酮COHCHO炔诺酮•C2H5COHCHO炔诺孕酮•OCOHCH炔孕酮•三大类激素

药物中，肾上腺皮质激素，雄性激素、孕激素结构基本类似，可用于分析的主要官能团有：(结构与分析方法的关系)1．甾体母核：浓H2SO4，显色反应2．Δ4-3酮及C=O：i)与盐酸羟胺、氨基脲缩合，测定其生成物的熔点进行鉴别。ii)与羰基试剂2,4-二硝基

苯肼、异烟肼等呈色。iii)利用在240nm和280nm波长处有紫外吸收。•3．C17-α－醇酮基：i)具有还原性，可被氧化试剂如：氨制AgNO3、四氮唑盐、斐林试剂氧化呈色。ii)可与硫酸苯肼作用，经分

子重排和缩合形成单苯腙再与C3位羰基缩合形成双苯腙，呈黄色。4．C17-COCH3甲基酮：含活泼次甲基，与亚硝酰铁氰化钠、间二硝基苯反应呈色。•5．C17-OH：制备衍生物，测m.p.。6．C17-酯：酯类反应，水解。7．卤素（F

-，Cl-）：实行有机破坏后，有F-，Cl-反应。如：F-:肤轻松、氟美松，Cl-:醋酸氯睾酮。•雌激素可用于分析的主要结构及官能团有：1．甾体母核：显色2．A环的酚羟基：Kober反应，与重氮苯磺酸盐偶合反应3．C17-OH或酮基；制备酯、腙等衍生物4．C1

7-CCH：与AgNO3氨试液生成白色的炔银沉淀。•第二节鉴别试验1、呈色反应：a.与强酸的呈色反应：与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色b.官能团的呈色反应：i)α-醇酮基与许多氧化剂如氨制AgNO3，斐林试剂液、四氮唑盐等反应呈色，其中

四氮唑盐的呈色反应最为常用，不仅可作TLC的显色剂，而且也是皮质激素含量测定的依据。•ii)Δ4-3酮C3－酮基能在酸性条件下与异烟肼、2，4－二硝基本肼等羰基试剂反应，缩合成黄色的腙•iii)-COCH3能与亚硝基铁

氰化钠、间二硝基酚、芳香醛类反应呈色。其中与亚硝基铁氰化钠的反应是黄体酮灵敏、专属而又简便的鉴别反应。在一定条件下，黄体酮显蓝紫色，而其他常用甾体激素均不显蓝紫色，而呈现淡橙色或不显色。[Fe(CN)5(NO=CH-CO)]iv)C3-OH（酚）与重氮苯磺酸

盐的偶合反应。v)氟的呈色反应：•2、沉淀反应：a.与碱性酒石酸铜（斐林试剂）的沉淀反应（橙红色沉淀）b.与氨制硝酸银（多仑试剂）的沉淀反应（黑色沉淀）c.与硝酸银的沉淀反应（白色炔银盐沉淀）d.与硝酸-硝酸银的沉淀反应（白色氯化银沉淀）•3、制备衍生物测定其熔点：（1）酯的生成：•（2）酮

肟的生成：•（3）缩氨基脲的生成：•（4）酯的水解：•4、水解产物的反应：5、紫外分光光度法：6、红外分光光度法：••7、薄层色谱法8、高效液相色谱法•第三节特殊杂质检查一、其他甾体二、游离磷酸盐三、甲醇和丙酮四、雌酮五、硒六、乙炔基主要采用HPLC来检查其他甾体•第四节含量测定一、四氮唑比

色法（TTC：深红色，BT：暗蓝色）•基本原理：C17-α-醇酮基具有还原性，在碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有色甲噆，，在可见光区有最大吸收。•讨论：（用于皮质激素的测定）1、基团影响：C11-酮基的反应速度快于C11-

羟基甾体；C21-羟基酯化后较其母体羟基的反应速度慢；当酯化了的基团为三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯时，反应更慢。2、溶剂和水分的影响：含水量大时会使呈色速度减慢，但含水量不超过5%时，影响不大，可采用95%乙醇。醛具有一定的还原性，会使吸收

度增高，故一般采用无醛醇作溶剂。•3、碱的种类及加入的顺序影响：在各种碱中，采用氢氧化四甲基铵能得到满意效果，故最为常用。一般先加四氮唑盐溶液再加碱液较好。4、空气中氧及光线的影响：反应及其产物对光敏感，因此必须用避光容器并置于暗处显色，同时在达到最大呈色时间后，立即

测定吸收度。5、温度与时间的影响：一般说来，呈色速度随温度增高加快，一般以室温或30℃恒温条件下显色，易得重现性较好的结果。•二、异烟肼比色法：H+本法主要用于甾体激素制剂的测定•讨论:1、溶剂的选择：只有用无水乙醇

和无水甲醇才能得到满意的效果。一般多选乙醇。2、酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度：当酸与异烟肼试剂的摩尔比为2：1时可获得最大吸收度，若用醋酸，则需将其浓度增大到25%。3、水分、温度、光线和氧的影响：当溶剂中含水量增高时，吸收度随之降低。温度升高，反应加速。当在具塞玻管中

不致使溶剂挥发及吸收水分的情况下，光与氧不影响反应。•4、关于反应的专属性：具有3-酮-4-烯的甾体激素在室温不到1h即可定量地与酸性异烟肼反应；其他甾酮化合物需在长时间放置或加热后方可反应完全，例如C20-酮化合物反应就很慢。C

17-酮化合物也可发生反应并形成腙，C-11酮在上述条件下不发生反应。具有共轭双键的另一些甾酮化合物，在相当长的时间内反应仍不能完全。•三、Kober反应比色法：雌激素与硫酸-乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后重新加热发生颜色改变，并在515nm附

近有最大吸收。第一步：与硫酸-乙醇共热产生黄色，在465nm处有最大吸收；第二步：加水或稀硫酸稀释重新加热显桃红色，在515nm处有最大吸收••铁酚试剂：又称铁-柯柏试剂，为硫酸亚铁铵加水溶解后，加硫酸及过氧化

氢，再与苯酚混合制成。优点：1、由于加入少量铁盐，能加速黄色形成的速率和强度；加速黄色转变为红色，也能增强红色的稳定性2、酚的加入，可以消除反应中产生的荧光并加速红色的形成•四、紫外分光光度法：原理：分子中具有共轭双键结构，紫外又吸收，在一定波长下测定吸收度即可定量。计算：标示量％

＝AXVXDXWEX100XWX标示量X100%•五、高效液相色谱法：HPLC具有快速、取样量少、准确、灵敏、分离效能高等特点。色谱条件：色谱柱：C18柱流动相：甲醇－水、乙腈－水•计算：采用内标法加校正因子1）校正因子（f）=As/msAr/mr2）含量

（mx)=fXAxAs/ms•