【文档说明】分子技术在肿瘤靶向药物治疗的应用课件.ppt，共(67)页，1.593 MB，由小橙橙上传

转载请保留链接：https://www.ichengzhen.cn/view-234674.html

以下为本文档部分文字说明：

分子技术在肿瘤靶向药物治疗的应用肿瘤靶向治疗（）◼依据已知肿瘤发生的异常分子和基因，设计和研发针对这些特定的分子和靶点药物，选择性杀伤肿瘤细胞的治疗方法；◼靶向治疗的前提就是明确肿瘤的特异靶基因变异类存在与否和变异类型；◼个体化治疗的雏形。荧光原位杂

交（，）技术简介◼=◼利用荧光标记的探针检测组织或细胞内与其互补的片段◼应用：遗传病诊断血液肿瘤实体瘤◼样本：羊水、绒毛、流产组织、外周血、骨髓、体液及各种肿瘤组织等用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未

知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位荧光标记探针探针变性样本DNA变性杂交工作原理检测染色体易位（）在淋巴瘤分

型中的应用技术在淋巴造血系统肿瘤中的应用检测技术特点◼不同类型的淋巴瘤染色体易位类型不同◼优点◼适用于形态学上难以诊断且结果不理想的标本；◼适用于细胞数量少，形态不典型的活检及穿刺组织。◼必须结合组织形

态学和免疫组化结果作最后诊断！！！基因检测在淋巴瘤的应用淋巴瘤检测基因临床应用套细胞淋巴瘤1融合基因辅助诊断滤泡性淋巴瘤2融合基因辅助诊断、判断预后弥漫性大B细胞淋巴瘤6基因断裂重组辅助诊断、判断预后伯基特淋巴瘤基因断裂重组辅助诊断粘膜相关淋巴组织淋巴瘤基因断

裂辅助诊断胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤2融合基因指导治疗弥漫大B细胞淋巴瘤（）按免疫组化亚型分为5阳性生发中心B细胞样变型()、非生发中心B细胞样变型()3类可根据10、6、1的表达区分生发中心B细胞样变型、非

生发中心B细胞样变型。>30%瘤细胞表达10或10(-)、6(+)、1(-)诊断为;其他病例则为。◆6基因断裂辅助诊断弥漫性大B细胞淋巴瘤◆6基因断裂重排判断预后目前研究确定至少40%的涉及6基因重排。一项针对102名患

者的6重排情况及其与预后关系的研究显示，6阳性患者诊断治疗36个月后，疾病停止发展的比率为82%，携带有6重排的病例预后较好。6基因断裂与弥漫性大B细胞淋巴瘤,K.NJ,1994.331(2):p.74-80.结果判读1融合基因可见于95%

的套细胞淋巴瘤，是套细胞淋巴瘤与其他淋巴瘤鉴别的重要指标。◆1融合基因辅助诊断套细胞淋巴瘤。1融合基因与套细胞淋巴瘤l正常细胞：两个红色信号，两个绿色信号。l异常细胞：一个红色信号，一个绿色信号，两个融合信号。

21基因检测试剂盒探针：21凋亡抑制因子2基因（22）,位于11号染色体;粘膜相关淋巴组织基因（11），位于18号染色体。2基因与1基因的融合导致凋亡抑制的增加，引起细胞不依赖于抗原刺激的生存优势。◆21融合基因的检测可以指导抗治疗胃淋巴瘤与幽门螺旋杆菌（）感染导致的慢性胃炎有关，12融

合基因阴性的患者抗治疗有效，阳性患者抗治疗无效。21融合基因检测意义l正常细胞：两个红色信号，两个绿色信号。l异常细胞：一个红色信号，一个绿色信号，两个融合信号。2重排发生在约8085%的患者中，检测2基因重排可以

辅助诊断。2阴性的患者3年生存率为100%，而阳性者只有54%；阴性者3年疾病无进展为87.5%，而阳性者只有13%。2融合基因与滤泡性淋巴瘤◼2融合基因辅助诊断滤泡性淋巴瘤◼2融合基因判断预后l正常细胞：两个红色信号，两个绿色信号。

l异常细胞：一个红色信号，一个绿色信号，两个融合信号。结果判读-阳性结果结果判读-阳性结果约80%的伯基特淋巴瘤病例发生t(8；14)（q2432）；约15%的伯基特淋巴瘤病例发生t(2；8)(p1124)；约5%发生t(8；

22)（q2411）。染色体易位导致基因断裂重组可能是伯基特淋巴瘤的一个标志，可以应用于临床上伯基特淋巴瘤的辅助诊断。基因断裂与伯基特淋巴瘤◆辅助诊断伯基特淋巴瘤结果判读-阳性结果技术在乳腺癌靶向治疗应用乳腺癌2基

因l致癌基因：2基因；l位点：17q11.212；l编码蛋白：跨膜蛋白（与l表皮生长因子受体部分同源）；l25-30%乳腺癌病人都有2的扩增；l2基因扩增是决定治疗是否有效的关键性指标。l2扩增的乳腺癌更具有侵袭性生长能力。乳腺癌2基因及蛋白检测2:3+完全强膜阳性细胞>30%2+,1检测是否有

基因扩增Her2基因检测流程石蜡组织标本IHC检测再用FISH方法检测—1+3+2+—+Herceptin治疗+再用FISH方法检测Herceptin治疗FISH检测+—再用FISH方法检测+A.无须计数的大簇团信号（高度扩增）B.颗粒状信号（R>10，高度扩增）C.须计数的颗粒状信号（R=3

.5，低度扩增）ACBHer-2基因扩增状况>30%的肿瘤细胞全部的细胞膜高强度着色免疫组化（3+）与FISH对比×40×100浸润性导管癌Ⅱ级IHC：+++FISH：呈簇团状高度扩增×100免疫组化（－）与FISH扩增阳性

浸润性导管癌Ⅱ级IHC：－FISH：呈簇状扩增肿瘤细胞不着色×40×100基因突变检测方法1酶A切割()2.变性梯度凝胶电泳()3.杂合双链分析法()4.化学切割错配()5.碳化二亚胺检测()6.酶促切割错配(,)7.单链构象多

态性()8.切割片段长度多态性9测序()10.双脱氧指纹图谱法(,)11.错配接合蛋白检测12.蛋白截短测试（）方法13.变性的高效液相色谱检测()14芯片技术()15.等位基因特异性扩增16.等位基因特异性寡核苷酸片段

分析()17.引物延伸检测()18.寡核苷酸连接检测()19.限制性片段分析(）20.突变体富集法（）21.蝎形探针扩增阻滞突变系统（）肺癌组织基因扩增和突变检测及其临床意义研究背景研究显示吉非替尼对部分晚期患

者的治疗效果非常显著。存在基因突变的患者更有可能对吉非替尼的治疗敏感。存在基因扩增的肺癌、肠癌病人对分子靶点药物更为敏感。检测大肠癌有无过度表达，只要>1%的癌细胞的胞膜强阳性染色即判断为3+，可作为应用西妥昔单抗的指征。◼检测基因扩增◼标本类型：石蜡包埋组织（手术、活检、穿

刺）◼冰冻组织◼胸、腹水沉渣细胞◼探针类型：/7◼定量检测基因突变分型◼突变类型：19（2235-2249位点）15缺失突变◼19（2240-2257位点）18缺失突变基因变异检测双体性三体性多体性扩增EGFR基因FISH检测状况肺癌石蜡分型技术检测突变存在突变肺

癌样本的琼脂糖凝胶电泳图71例肺癌组织中检测出6例突变样本检测15缺失阳性病例结果红色阈值线以上的扩增曲线即为阳性标本的扩增曲线，按荧光信号值的高低依次为9号、12号、13号、55号、38号和33号标本15缺失突变型的测序图红色阈值线以上的扩增曲线即为阳性标本的扩增曲线，按荧光信

号值的高低依次为2号、36号、和40号标本FQ-PCR检测18bp缺失阳性病例结果目前突变检测常用技术方法◼直接测序◼焦磷酸测序◼高分辨率熔解曲线◼芯片◼杂交◼肿瘤组织的确认和筛选显微切割肿瘤提取相应的反应或杂交相关的分析和检测突变检测基本流程图直接测序(

)•扩增后产物直接测序•双脱氧核苷酸链终止法(法)•片段是荧光标记的，这些片段经过平板胶电泳或毛细管电泳得到分离，荧光分子被激发而发光，发出的光信号被检测系统检测突变检测结果疗效预测标志物与预后判断标志物◼疗效预测标志物：

◼能够预测某种特定治疗方式疗效的标记物◼基因突变导致肿瘤对抑制剂抵抗◼预后判断标志物：◼在不考虑治疗因素的情况下能够判断患者结局的标记物◼18号染色体长臂（18q）缺失◼某些分子标志物兼具两种作用◼胸腺嘧啶合成酶（）作为预后因子的价值=;=--(1992),(1992)&()--(1

998)(1996)()--(2000)(1993)◼(西妥昔单抗)◼人源化嵌合单抗（1）◼靶向作用于表皮生长因子受体（）◼阻断和α与的结合，抑制酪氨酸激酶活性和其后的肿瘤生长◼200４年获得审批资格治疗结直肠癌◼（帕尼单抗）◼完全人源化单克隆抗体(2)◼靶向作用于表皮生长因子受体（）◼2

005年7月获得快速通道审批资格治疗结直肠癌结直肠癌分子靶向治疗药物突变◼突变可不依赖受体途径，自行激活通路◼导致耐药◼突变与疗效及患者生存相关◼突变并非孤立事件◼突变常伴随突变，并与岛甲基化表型()1,2相关◼突变常伴随3K突变3èA,.J2008;

26:374–379=基因野生型患者能从这类药物治疗中获益。基因突变型患者并不能从抗治疗中获益,反而徒增不良反应危险和治疗费用；抗治疗和突变相互排斥基因抗治疗关系密切◼2009年7月批准了对西妥昔单抗和帕尼单抗说明书标签的修改：◼结

直肠癌分子靶向治疗药物注明基因突变的结直肠癌患者不推荐这使用这两种用药物。l基因突变:20-60%结直肠癌l基因突变发生在肿瘤恶变的早期，原发灶和转移灶的基因高度保持一致基因突变➢临床实践指南指南明确指出所有转移性结直肠癌患者➢都应检测基因状态。➢美

国美国临床肿瘤学会()推荐把基因突变检测作为➢结直肠癌患者接受单抗治疗的预测指标。➢欧盟药品审评管理局规定：及➢用于的治疗前，患者必须确定为野生型。与结直肠癌治疗结直肠癌（）缺乏基因突变◼对爱必妥单药治

疗转移性结直肠癌（）临床试验中110例活检标本进行的研究未发现基因突变（外显子18－21）S,.J2007;25:3230–3237抗治疗前检测基因突变的理由1.避免不必要的不良反应2.控制不必要的费用3.确认能够从治疗中获益的野生型患者4.避免治疗对突变型患者的潜在毒性a29,2008—810名

胃癌病人有2基因的扩增，约占参与实验总人数的22%；晚期胃癌接受标准化疗联合治疗的患者：平均生存期由11.1个月延长到13.8个月；高倍扩增者甚至可达16个月；将死亡风险降低26%。2与胃癌分子靶向治疗美国临床肿瘤学会提出：◆可成

为2阳性晚期胃癌患者的◆治疗选择。◆晚期胃癌患者在确诊时都应接受2检测；HER基因与胃癌预后HER2基因扩增的晚期胃癌患者往往预后不佳。◼无HER2基因扩增的晚期胃癌患者中位生存期12.6个月，而有基因扩增者中位生存期仅5.5个月。◼存在HER2基因扩增的胃癌患者术后5年生存率为

21.4%，而无扩增的则为63.0%。谢谢观赏