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无菌检查法专业医学知识宣讲无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现

微生物污染2无菌检查法专业医学知识宣讲环境洁净度2010版无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行2015版无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影

响供试品中微生物的检出。3无菌检查法专业医学知识宣讲培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，

一般可在一年内使用。4无菌检查法专业医学知识宣讲培养基PH区别2010版2015版改良马丁培养基调节pH值使灭菌后为6.4±0.2胰酪大豆胨液体培养基调节pH使灭菌后pH值为7.3±0.2营养肉汤培养基调节pH值使灭菌后为7.2±0.2胰酪大豆胨琼脂培养基调节pH使灭菌后在25℃

的pH值为7.3±0.2营养琼脂培养基调节pH值使灭菌后为7.2±0.2沙氏葡萄糖液体培养基调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2改良马丁琼脂培养基调节pH值使灭菌后为6.4±0.2沙氏葡萄糖琼脂培养基调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.25

无菌检查法专业医学知识宣讲培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。无菌性检查每

批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。6无菌检查法专业医学知识宣讲培养基的适用性检查蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。7无菌检查法专业医学

知识宣讲培养基的适用性检查培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量

为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。9无菌检查法专业医学知识宣讲培养基接种直观区别2010版2015版硫乙醇酸盐流体培养基9支金黄

色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基7支金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌改良马丁培养基5支白色念珠菌、黑曲霉胰酪大豆胨液体培养基7支枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉10无菌检查法专业医学知识宣讲方法适用性试验菌种及菌液制备除大肠埃希菌（Escheric

hiacoli）[CMCC(B)44102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。11无菌检查法专业医学知识宣讲方法适用性试验薄膜过滤法取每种培养

基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作

为对照。置规定温度培养3～5天，各试验菌同法操作。12无菌检查法专业医学知识宣讲方法适用性试验结果判断与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进

行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。13无菌检查法专业医学知识宣讲供试品的

无菌检查无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明有效性，且对微生

物无毒性。14无菌检查法专业医学知识宣讲供试品的无菌检查检验数量检验数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量检验量是指供试品每个最小包装接种至每份培养基的最小量（g或ml）。15无菌检查法专业医学知识宣讲供试品的无菌检查阳性对照应根据供试品特性选择阳性对照菌：无

抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制

备同方法适用性试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好。阴性对照供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴16无菌检查法专业医学知识宣讲供试

品的无菌检查薄膜过滤法薄膜过滤法应采用封闭式薄膜过滤器。无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45μm。直径约为50mm。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用

前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，且总冲洗量不得超过17无菌检查法专业医学

知识宣讲供试品的无菌检查水溶液供试品取规定量，直接过滤，或混合至含不少于100ml适宜稀释液的无菌容器中，混匀，立即过滤。如供试品具有抑菌作用，须用冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数一般不少于三次，所用的冲洗量、冲洗方法同方法适用

性试验。除生物制品外，一般样品冲洗后，1份滤器加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，1份滤器加入100ml胰酪大豆胨液体培养基。18无菌检查法专业医学知识宣讲供试品的无菌检查培养及观察将上述接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定

的温度培养14天；一份置30～35℃培养，一份置20～25℃培养。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养3天，观

察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。19无菌检查法专业医学知识宣讲培养及观察直观区别2010版2015版培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新

鲜培养基中，细菌培养2天、真菌培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊20无菌检查法专业医学知识宣讲供试

品的无菌检查结果判断阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少

一个条件时方可判试验结果无效：（1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。（2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。（3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技

术不当引起的。试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。21无菌检查法专业医学知识宣讲谢谢！22无菌检查法专业医学知

识宣讲