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维生素的测医学宣教第二节脂溶性维生素的测定❖一、维生素A的测定❖二、β-胡萝卜素的测定❖三、维生素D的测定（HPLC法）❖四、维生素E的测定3维生素的测医学宣教一、维生素A的测定❖原理：维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑作用生成

蓝色物质，其深浅与溶液中维生素A的量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测定。❖测定：样品处理：用皂化法或研磨法对样品进行预处理；测定：准确取一定量的维生素A标准液于4～5个容量瓶中，以三氯甲烷配制

标准系列。再取相同数量比色管顺次取lmL三氯甲烷和标准系列使用液lmL，各管加入乙酸酐1滴，制成标准比色系列，于620nm波长处以三氯甲烷调节吸光度零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加9mL

三氯化锑-三氯甲烷溶液。于6s内测定吸光度，绘制标准曲线图。于一比色管中加入l0mL三氯甲烷，加入1滴乙酸酐为空白液。另一比色管中加入lmL三氯甲烷，其余比色管中分别加入lmL试样溶液及1滴乙酸酐。其余分析步骤同标准曲线的绘制。结果按公式计算：4维生素

的测医学宣教1000100=mVX式中X—试样中维生素A的含量(如按国际单位，每1国际单位=0.3µg维生素A)，mg/lOOg；ρ—由标准曲线上查得试样中维生素A的含量，µg/mL；m—试样质量，g；V—提取后加三氯甲烷定量之体积，mL；100—以每百克

试样计。5维生素的测医学宣教二、β-胡萝卜素的测定❖原理：试样中的β-胡萝卜素，用石油醚+丙酮(80+20)混合液提取，经三氧化二铝柱纯化，然后以HPLC法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。6维生素的测医

学宣教三、维生素D的测定（HPLC法）❖原理：将样品皂化，由酯型转化为游离型，用高效液相色谱测定。❖取5g～10g样品加1g焦性没食子酸，50mL乙醇溶液，在磁力搅拌器下使样品均匀溶解后加入30mL50%K

OH溶液，在（50±2）℃上搅拌回流40mim。取下回流液，冲凉后用50mL、30mL、20mL、10mL乙醚萃取，合并乙醚层，用水洗至中性，过无水Na2SO4，在50℃下浓缩至约5mL，取下后用甲醇定容至10mL，待测定。❖吸取处理好的样品20μL，注入高效液相色谱仪，进行HPLC分析

，同时进行标准溶液的分析，将样品的峰与标准溶液峰比较，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。7维生素的测医学宣教四、维生素E的测定❖原理：试样中的维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱C18反相柱分离维生素

E，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。❖1.色谱条件(参考条件)：预柱：ultrasphereODSlOµm，4mm×4.5cm；分析柱：ultrasphereODS5µm，4.6mm×25cm；流动相：甲醇+水(98+2)混匀，临用前脱气；紫外检测器波长300nm，量程0.02；

进样量20µL；流速1.7mL/min。❖2.试样分析❖取试样浓缩液20µL，待绘制出色谱图及色谱参数后，用标准物色谱峰的保留时间定性。8维生素的测医学宣教第三节水溶性维生素的测定❖一、维生素B1（硫胺素）的测定❖二、维生素B2的测定❖三、维生素C的测定9维生素的测医学宣教一、维生素

B1（硫胺素）的测定❖（一）原理：硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线照射下发出荧光。没有其他物质干扰时，此荧光相对强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。❖（二）测定：依次对样品进行提取和净化。❖荧光测定条件：激发波长365nm，发射波长435nm；激发波狭缝5

nm，发射波狭缝5nm。❖依次测定下列荧光强度：①试样空白荧光强度(试样反应瓶A)；②标准空白荧光强度(标准反应瓶A)；③试样荧光强度(试样反应瓶B)；④标准荧光强度(标准反应瓶B)。❖结果按公式计算10维生素的测医学宣教1000100)()(210

−−=VVmIIVIIXbsx式中X—试样中硫胺素含量，mg/100g；Ix—试样荧光相对强度；I0一试样空白荧光相对强度；Is—标准荧光相对强度；Ib—标准空白荧光相对强度；р—硫胺素标准使用液

浓度，µg/mL；V—用于净化的硫胺素标准使用液体积，mL；V1—试样水解后定容之体积，mL；V2—试样用于净化的提取液体积，mL；m—试样质量，g；100/1000—试样含量由微克每克(µg/g)换算成毫克每百克(mg/lOOg)的系数。11

维生素的测医学宣教二、维生素B2的测定❖（一）原理：核黄素在440～500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光相对强度与核黄素的浓度成正比。在波长525nm下测定其荧光相对强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2S204)，将核黄素还原为无荧光的物质，然后再测定试液中残

余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。❖（二）测定：样品制备；核黄素吸附柱；过柱与洗脱；标准曲线制备。❖于激发光波长440nm，发射光波长525nm，测量试样管及标准管的荧光值。待试样及标准的荧光值测量后，在各管的剩余液(约5m

L～7mL)中加O.1mL20％低亚硫酸钠溶液，立即混匀，在20s内测出各管的荧光值，作各自的空白值。❖结果按公式计算：12维生素的测医学宣教1000100)()(0−−=fmIImIIXbssx

式中X—试样中核黄素的含量，mg/100g；Ix—试样管荧光相对值；I0—试样管空白荧光相对值；Is—标准管荧光相对值；Ib—标准管空白荧光相对值；f—稀释倍数；m—试样质量，g；ms—标准管中核黄素质量，µg；1000100—将试样中核黄素含量由微克每克(µ

g)换算成毫克每百克(mg/100g)的系数。13维生素的测医学宣教三、维生素C的测定❖（一）原理：总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2.4—二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在H2SO4溶液中的含量与总抗坏血酸成正比，

进行比色定量。❖（二）测定：样品的制备；绘制标准曲线。按公式计算：14维生素的测医学宣教fmVX=1000100式中X—样品中总抗坏血酸的含量，mg/100g;ρ—由标准曲线查得或回归方程算得“样品氧化液”中总抗坏

血酸的浓度，μg/mL；V—试样用1%草酸溶液定容的体积，mL；f—样品氧化处理过程中的稀释倍数；m—试样质量，g。15维生素的测医学宣教小结❖本章概述了维生素常用的荧光法、高效液相色谱法、化学滴定法等几种测定方法。通常，这些方法可用于多种维生素和食品基质的分析，但其分析方

法需能够适合于待分析物质及其生物基质，其中包括样品的制备、提取和定量测定。在使用HPLC的色谱分析法时，方法的有效性尤为重要，因为这些方法着重于化合物的分离，而不是鉴定，因此，包括化合物的定性鉴定以及定量测定都同样是非常重要，且十分必要的。16维生素的测医学宣教习题与思考题1对于

某一特定的维生素，在选择分析方法时应考虑哪些因素?2大多数维生素定量方法中，维生素必须先从食品中提取出来，通常使用哪些方法提取维生素?对于水溶性维生素和脂溶性维生素，分别给出一个适当的提取方法。3维生素A比色法测定原理？4在生产和储备食品过程中，L-抗坏血酸能被氧化成L-脱氢抗坏血酸

。你如何用2,6-二氯酚靛酚滴定法来测定总的维生素C含量，以及如何分别测定这两种形式？17维生素的测医学宣教