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体外放射配基结合分析及临床应用卢汉平中山大学基础医学院实验核医学教研室E-mail:luhp@mail.sysu.edu.cn受体放射配基结合分析RadioligandBindingAssayofReceptor,RBA用放射性核素标记配基与相应的受体行特

异性结合反应从而对受体进行定性和定量的方法。分离配基受体复合物放射配基+受体分子分析受体数量和亲和力RBA的分类◼定性RBA：通过反应的量效关系及某些参数的变化等来判断受体的类型、单位点或多位点系统、受体与配基相互作用的特点(可逆或不可逆，受

体间的合作作用)。◼定量RBA：在已知反应性质的基础上，通过结合反应分析组织或细胞中受体数目（bindingsite,结合位点数）。受体的免疫组织化学Immunohistochemistry优点：◼强特异性（单个氨基酸水平）◼高敏感性◼高分辨力缺点：

◼半定量◼无法测定亲和力RBA相关的基本慨念◼受体(receptor,R)◼配基(ligand,L)：激动剂、激动剂、内源性配基受体与配基结合反应的质量作用定律K1V1[R]+[L][RL]EK2V2KD:平衡解离常数[RT

]:受体初始浓度(总浓度)[LT]:配基初始浓度[RL]2-[RL][RT+LT+Kd]+[RT][LT]=0(Goldstein)]RL[]RLLT][RLRT[KD−−=受体与配基结合反应的主要特点：◼可饱和性(Saturability)◼可逆性(Revers

ibility)◼特异性(Specifity)◼与生理效应一致性。受体的分类四级分类：◼类(class)◼亚类（subclass）◼型(type)◼亚型(subtype)受体的类单跨膜区段单跨膜区段G蛋白偶联配基门控有酶结构无酶结构7跨膜区段离子通

道配基举例生长因子细胞因子肽类神经递质胰岛素生长激素神经递质氨基酸泌乳素前列腺素激酶区段可溶性激酶第二信使离子结构(示意)膜膜外膜内四大类膜受体示意图五类受体的名称12345配基门控离子通道受体G蛋白偶联7次跨膜受体有酶结

构的单次跨膜受体无酶结构的单次跨膜受体核受体RBA的基本原理饱和曲线00.0010.0020.0030.0040.0050.00600.10.20.30.40.50.60.70.8配基浓度(nmol/L)复合物浓度(nmol/L)RT=

0.005nmol/LKD=0.05nmol/LKD=0.20nmol/LKD=0.10nmol/L渐近线[RT-RL][L][RT-RL][LT-RL]KD==----------==--------

-------[RL][RL]SB/FSlope=-1/KdBmaxSBfmol/mlScatchard作图受体最大结合容量的表示方式⚫胞浆及胞膜等的受体含量:fmol/mg蛋白⚫胞核的受体含量:fmol/mgDNA⚫完整细胞受体的含量:结合位点/细胞(site/cell)或

fmol/106cellRBA的基本方法制备待测受体的离体标本加放射配基温育，反应达到平衡终止反应，分离结合与游离部分测定结合部分的放射性强度数据处分理，求出有关参数配基的选择◼标记配基：高亲和力、高特异性高比活度高放化纯度（98%）化学稳定性。◼非标记配基高亲和力高浓度

受体显像配基基本要求◼半衰期适中、发射正电子或单光子、SA〉3.7TBq/mmol◼易穿透生物屏障◼代谢行为和作用机制清楚◼特异性高◼亲和力高◼选择性强◼标记后具完整的生物活性和药理活性◼动态显像时用生理数学模型可作受体密度的模拟定量分析受体在医学研

究中的应用疾病时受体的变化：◼受体数目的变化◼受体亲和力的变化◼受体特异性的变化◼受体的自身抗体◼受体-效应器偶联机理异常受体理论在疾病研究中的应用◼探讨疾病的发病机理◼受体的变化寻找疾病的病因◼根据受体测定结果选择治疗方案◼受体变化作为疾病预后指标◼寻找防治措施选择治疗方案34

4例乳腺癌内分泌治疗效果与ＥＲ、ＰＲ的关系___________________________________________________________受体状态治疗例数有效例数有效率%_________________________________________________

___________ER+、PR-911213.2ER-、PR+10330.0ER+、PR-1253729.6ER-、PR+1188975.4__________________________________________________

__________ＥＲ和ＰＲ与乳腺癌化疗效果的关系(136例)____________________________________________________________受体状态治疗例数有效例数有效率%_

___________________________________________________________ER+25312.0PR+800ER-453475.6PR-342264.7ER+、PR+242187.5_____________________

_______________________________________32例乳腺癌ER状态与激素治疗关系____________________________________________________

________cytosol/nuclear治疗例数反应例数无反应例数____________________________________________________________＋／＋22184－／－615＋／－303－／＋101____________

________________________________________________乳腺癌胞浆ＥＲ不同水平与激素治疗的关系______________________________________________

______________ER含量(fmol/mg.Pro)有效率%____________________________________________________________＞10081

3～10045＜30____________________________________________________________乳腺癌ＥＲ状态与内分泌治疗效果的关系________________

____________________________________________有效例数/治疗例数药物----------------------ER+ER-__________________________________

__________________________Tamoxifen32/671/5Nafoxidene7/100/8Stilboostrol9/121/17Dophrectomy28/432/74Adrenalectomy15/22

1/9Androgens10/282/22Glucocorticoids15/320/19Hypophsectomy9/141/12-----------------------------------

-------------------------总有效率128/235(54.5%)7/176(4%)____________________________________________________________Degenshein根据乳腺癌受体表达情况和癌

转移情况，提出如下治疗方案，并得到临床广泛采用◼ＥＲ＋，腋下淋巴结无转移，手术治疗外可不用内分泌治疗，要作定期复查；◼ＥＲ＋、腋下淋巴结有转移，要加激素治疗或预防性去势◼ＥＲ－、腋下淋巴结无转移、绝经前患者，术后加化疗◼晚期癌或复发

癌，ＥＲ＋ＰＲ＋，内脏无转移者，用激素治疗；内脏有转移者，用激素治疗再加化疗。ER表达与内分泌治疗不相符：◼肿瘤异质性◼肿瘤组织类固醇代谢酶的灭活作用◼受体本身缺陷◼内存激素变化的影响◼雌抑素(estrocolyone)失活◼受体阳性的标准不准确和不一致◼

检测受体的标本的不均一性和代表性。◼肿瘤的病因的复杂性或多元神经系统疾病与受体•帕金森氏病•亨廷顿氏病•癫痫•忧郁•精神分裂症帕金森氏病帕金森氏病患者脑中受体的变化受体的种类纹状体黑质多巴胺D1受体↑／＝多巴胺D2受体未治疗例↑左旋多巴治疗↓／＝mACh受体↑／

↓5-HT受体＝GABA受体＝↓脑啡肽受体↓（只有被壳↑）阿片(纳洛酮)受体↓神经加压索受体↓亨廷顿氏病亨廷顿氏病患者死后脑中受体的变化大脑皮质尾状核被壳苍白球黑质GABA-R＝↓↓↓↑↑BDZ-R＝/↑↓↓↑DA-R＝↓↓D1-R↓↓D2-

R↓＝mACh-R＝↓↓↓↓↓Glu-R＝↓↓↓↓↓↓↓～↓↓：明显减少，↓：减少，＝：不变，↑：增加GABA-R=Γ-氨基丁酸受体，BDZ-R=苯二氯卓受体，DA-R＝多巴胺受体，D1＝D1受体，D2＝D2受体，mACh-R＝蕈毒碱样乙酰胆碱受体，Glu-R＝谷氨酸受体癫痫癫痫患者的病

灶组织、脊髓液中神经递质及受体的变化病灶组织脊髓液多巴胺(DA)↓高香草酸(HVA)↓＝去甲肾上腺素(NA)↑↑神3-甲氧基-4-羟基苯乙二醇(MHPG)＝5-羟基吲哚醋酸(5-HIAA)↑↓＝经乙酰胆碱(Ach)↑y-氨基丁酸(GABA)↑↓＝↓

＝递谷氨酸脱羧酶(GAD)↓＝GABA转氨酶＝质牛磺酸↓＝甘氨酸↑生长激素抑制素＝[3H]GABA受体↓受α1-肾上腺素受体↓体苯二氮卓受体＝PET研究苯二氮卓受体↓↓：减少，↑：增加，＝：不变。PET＝电子发射断层扫描忧郁去甲肾上腺素受体5-羟色胺受体ACh—

Rα1α2β5-HT15-HT2mACh三环类抗忧郁药↑↓↓→↓非三环类抗忧郁药↑→↓↓→↓↓单胺氧化酶抑制剂(MA()I)↓→↑↓↓↓↓电抽搐疗法↓→→↑↑Ach-R：乙酰胆碱受体；mACh：毒蕈碱样乙酰胆碱慢性或反复处

理↑→通过忧郁病治疗脑内各种受体的变化丙咪嗪结合部位精神分裂症精神分裂症患者死后脑内多巴胺受体的变化配体配体浓度脑部位症例数置换浓度结果[3H]-螺环O.8nM尾状核19丁克吗↑哌丁苯(其中不服药5)(1uM)被壳↑侧坐核↑O.5nM侧坐核26ADTN*→(1

0uM)肉桂硫胺→(1uM)O.5nM尾状核服药21丁克吗Bmax↑，Kd↑不服药7(1uM)Bmax→，Kd↑侧坐核服药13ADTNBmax↑，Kd↑不服药4(10uM)Bmax→，Kd→尾状核服药12丁克吗Bma

x↑，Kd↑不服药4(1uM)Bmax→，Kd↑侧坐核服药9ADTNBmax↑，Kd↑不服药13(10uM)Bmax→，Kd→精神分裂症患者死后脑内多巴胺受体的变化配体配体浓度脑部位症例数置换浓度结果0.1nM尾状核11丁克吗↑被壳(1u

M)Bmax↑，Kd→颞皮质↑O.1nM尾状核6丁克吗→被壳5(1uM)Bmax→，Kd→前部扣带圆6→1nM尾状核9丁克吗↑被壳(1uM)↑1nM尾状核27丁克吗↑被壳37(1uM)Bmax↑，Kd→

[3H]氟哌1.7nM尾状核18丁克吗↑啶醇被壳(100nM)↑2nM尾状核29丁克吗↑被壳(100nM)↑[3H]-阿朴3.2nM尾状核7丁克吗→被壳(1uM)→侧坐核3→颞皮质→ADTN＝2-氨-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢萘PET脑受体研究◼多巴胺受体11C-N-

甲基螺环哌丁苯、11C-Nomifensine、11C-SCH23390◼5-HT受体11C-氟哌喹11C-5羟色胺酸◼阿片受体11C-carfentanil、11C-环丙羟丙吗啡◼苯二氮卓受体11C-Ro1

5-1788、11C-哌硫吡酮◼载体负荷实验与定量解RBA的应用和前景◼阐明药物和激素递质的作用机制◼讨疾病的病因和发病机理◼新药设计和药物筛选◼定组织或血液中药物浓度◼受体显像与受体介导治疗