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T细胞表位的研究医学知识讲解第一部分T细胞表位的基本概念2T细胞表位的研究医学知识讲解3抗原结合价Antigenicvalence能与抗体分子结合的抗原表位的总数。半抗原——单价抗原完全抗原——多价抗原表位Epitope抗原决定基AntigenicDeterm

inant决定抗原特异性的特殊化学基团，是与抗体或抗原受体结合的基本结构单位。1、抗原表位的概念T细胞表位的研究医学知识讲解42、抗原表位的类型顺序表位（sequentialepitope)/线性表位由连续性线

性排列的短肽构成。构象表位(conformationtialepitope)/非线性表位短肽或多糖残基在序列上不连续性排列，在空间上形成特定的构象。T细胞表位的研究医学知识讲解T细胞表位与B细胞表位5T细胞表位的研究医学知识讲解63、共同抗原表位(commonepitope)不同抗原间含有

的相同或相似的表位。交叉反应(cross-reaction)抗体或致敏淋巴细胞对具有相同或相似表位的不同抗原的反应。T细胞表位的研究医学知识讲解7T细胞表位的研究医学知识讲解MHCclassIpeptidesof8-10aminoa

cidsMHCclassIIpeptidesof>13aminoacidsb2-Ma-chainPeptidea-chainb-chainPeptide4.MHC分子和抗原肽的相互作用8T细胞表位的研究医学知识讲解抗原肽和MH

C相互作用的分子基础*锚定残基（anchorresidue）在抗原肽-MHC分子复合物中，抗原肽的两个或两个以上专司和MHC分子结合的氨基酸残基称为锚定残基。9T细胞表位的研究医学知识讲解YIMHC分子YIMHC分子PSASIKSPSAIKS共用模体10T细胞表位的研究医学知识讲解MHCI类

分子胞外区的结构11T细胞表位的研究医学知识讲解抗原肽和HLA相互作用的分子基础MHC限制性;CD4与CD8表位的差别；人和其他动物的差别12T细胞表位的研究医学知识讲解13T细胞表位的研究医学知识讲解14T细胞表

位的研究方法1.多肽片段的来源降解；表达；人工合成2.MHC分子的结合直接结合；预测3.抗原特异性T细胞的来源感染或者免疫动物或病人筛选方法细胞系的建立4.检测指标活化；增殖；细胞因子；杀伤作用T细胞表位的研究医学知识讲解15T

细胞表位的研究意义1.检测刺激细胞使用Tetramer技术MHC2.疫苗表位疫苗3.治疗T细胞表位的研究医学知识讲解16第二部分SARS-CoVS蛋白T细胞表位的研究T细胞表位的研究医学知识讲解17T细胞表位

的研究医学知识讲解1.SARS-CoVSDNA疫苗Zhi-yongYang(NIH)Nature.2004,428(1)18T细胞表位的研究医学知识讲解2.免疫方法8wfemaleBALB/cprimeatweek050ugDNAboosttwiceatweek3

,62-3wafterprime4-6wafterboost1-2wafterboosttoobservetheeffectofprimeimmunizationtoobservetheeffectofbo

ostimmunizationtoobservetheeffectoflongtermimmunization:mousesacrificed50ugDNAi.mi.m19T细胞表位的研究医学知识讲解3.单细胞悬液的准备淋巴结脾肺剪碎（消化），研磨，200

目筛网过滤，裂解红细胞，2×106/ml20T细胞表位的研究医学知识讲解4.SARS-CoVS蛋白多肽169条,17-19aa,10aa重叠(NIHNIAIDVRC)P1S1-17P2S8-25P3S16-22P168S1200-1216P169S1207-125

521T细胞表位的研究医学知识讲解1.S抗原刺激以后IFN-（图A）和IL-2的产生（图B）结果与讨论Theemptycirclesrepresenttheresultsintheabsenceofpeptidesandsoli

dcirclesrepresenttheresultsinthepresenceofpeptides.22T细胞表位的研究医学知识讲解23T细胞表位的研究医学知识讲解24Fig.2.VerificationofpotentialSARSCoVSepitope

sPotentialSARSCoVSepitopesP50,P51,P59andP60inpool3,andP141,P144,P151andP152inpool8wereusedtostimulatesplenocytesfromSARSCoVSDNAimmunizedBALB/cmice.

IFN-γproductionwasdetectedbyELISA(A)andELISPOT(B),respectively.Eachsymbolrepresentstheresultsofanindividualexperiment(n=3~7

).Inaddition,intracellularcytokinestaining(C)wasperformedtodetermineCD4+orCD8+Tcellpopulation.“0”representsthenon-peptidestimulatedcon

trol.Numbersatthecornerineachsamplerepresentthepercentageofpositivecells.Representativeresultsofthreeindependentexp

erimentswereshown.T细胞表位的研究医学知识讲解25Fig.3.Identificationofnewsynthetic10aaCD4andCD8epitopesTheoverlappedaminoacidsbetweenP50andP51(N50),andbetweenP59

andP60(N60)weresynthesized.PeptidesN50andN60wereusedtostimulatesplenocytesfromSARSCoVSDNAvaccine-immunizedmice.P50andP60wereusedasposit

ivecontrols,respectively.ELISA(A)andELISPOT(B)wereperformedasdescribedabove.Furthermore,N50and60wereserialdilutedt

ostimulatesplenocytesfromtheDNAimmunizedmice,ELISPOT(C)wasperformedtodetectnumbersofantigenspecificIFN-γproducingcells.Experimentswerecarriedo

utinduplicateandrepresentativeresultswereshown.“0”representsnon-peptide-culturednegativecontrol.T细胞表位的研究医学知识讲解26Fig.4.Synergisticro

lesofpeptideN50andN60inH-2bandH-2drestrictedmiceBALB/candC57BL/6micewereimmunizedbySARSCoVSDNAvaccineasdescribedpreviously.1-2weeksafterfinalboostv

accination,N50andN60wereadministratedaloneorcombinedtostimulatesplenocytesfrombothkindsofheterogeneousmiceatthesametimes.ELISA(A),ELISPOT(B)andFACS(

C)wereperformedtodetectIFN-γ.“0”representsnon-peptidecontainednegativecontrol.Experimentsweredoneinduplicateandrepresentativeresult

swereshown.T细胞表位的研究医学知识讲解27T细胞表位的研究医学知识讲解28Fig.6.N50andN60canelicitantigenspecificimmuneresponsesinvivoBALB/cmicewereprimedtwi

cewiththeDNAvaccines.3weekslater,miceweredividedintofourgroups(n=4),injectedbypeptides(N50andN60,50μgofeach)plusCpG

ODN(25μg),peptide,CpGODNandPBS,respectively.1-2weeksafterboostvaccination,singlecellsuspensionswerepreparedfromlymphnode(LN),spleenandlung.

CellswerestimulatedbypeptideN50andN60plusanti-CD28.ELISA(A)andELISPOT(B)wereperformedtodetecttheantigenspecificIF

N-γlevelsandcellsineachgroup.FACSwasperformedtodetectthefrequenciesofantigenspecificIFN-γand/orIL-2producingcells

inCD4+(C)andCD8+(D)Tcellpopulations,respectively.Experimentsweredoneinduplicateandrepresentativeresultswereshown.T细胞表位

的研究医学知识讲解29T细胞表位的研究医学知识讲解30T细胞表位的研究医学知识讲解第三部分SARS-CoVS蛋白CTL表位残基的初步研究31T细胞表位的研究医学知识讲解32T细胞表位的研究医学知识讲解锚定位残基33T细胞表

位的研究医学知识讲解34T细胞表位的研究医学知识讲解35T细胞表位的研究医学知识讲解37T细胞表位的研究医学知识讲解38T细胞表位的研究医学知识讲解39T细胞表位的研究医学知识讲解40T细胞表位的研究医学知识讲解41T细胞表位的研究医学知识讲解42第四部分SARS-CoV

S蛋白B细胞表位的研究T细胞表位的研究医学知识讲解43T细胞表位的研究医学知识讲解44T细胞表位的研究医学知识讲解45图2含B细胞表位的多肽组的筛选Fig.2Scanningpeptidepoolwhichcontainedpotential

SproteinBcellepitopeT细胞表位的研究医学知识讲解46图35号多肽组中B细胞表位的筛选Fig.3ScanningBcellepitopeinpool5T细胞表位的研究医学知识讲解47图

4使用Bcipep数据库预测B细胞表位Fig.4predictSARS-CoVSproteinBcellepitopebyBcipepdataT细胞表位的研究医学知识讲解48T细胞表位的研究医学知识讲解49T细胞表位的

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