【文档说明】癌症的基因诊断和反义核酸基因治疗治疗课件.ppt，共(33)页，92.001 KB，由小橙橙上传

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“癌症的基因诊断和反义核酸基因治疗治疗”专题汇报一、一般情况介绍时间：9月11日——9月17日地点：福建省血液病研究所福建医科大学附属协和医院血液内科学员来源：黑龙江云南江西湖南广东南宁福建讲授方式C

AI博导+博士+技术员内容：理论和实验部分理论部分：13个专题（讲座）实验部分：8项内容（示范）福建医科大学内科博士点福建省“211工程”重点学科福建省科委的优先发展研究所福建省教委和福建省卫生厅的重点学科国家药品监督管理局的临床药理基地专业技术人员67人，教授6人，副高10人国家级专家博导3人硕

导9人62项科研成果（国际、国家、省部及省厅级）培养博士22人硕士45人研究方向癌症的基因诊断和基因治疗细胞因子与造血调控造血细胞培养与造血干细胞移植福建省血液病研究所简介1、反义核酸基因治疗癌症研究现状与展望2、基因转移在肿瘤治疗中的应用3、反义技术在体外净化中的应用4、癌症Bcl-2基因5、

癌症的c-myc基因诊断及反义核酸基因治疗6、癌症MDR1基因7、慢粒白血病bcr-abl融合基因的检测及基因治疗8、寡脱氧核苷酸的合成及纯化9、癌症基因缺损的测序诊断10、核酶在癌症基因治疗中的应用11、肽

核酸在癌症治疗应用中进展12、白血病细胞因子自分泌及其意义13、裸鼠、Scid鼠肿瘤模型的建立及其应用内容理论1、免疫组化2、癌基因荧光定量PCR3、癌细胞系的培养与保存技术4、FCM5、癌症基因缺损的测序诊断技

术6、基因药物反义核酸的纯化7、动物模型的建立及反义核酸治疗癌症动物实验技术考试1.5小时实验部分现代科学证明人类所有的疾病都与基因变异或受损有关人类现有的18000种疾病第一类单基因病如血友病、多指病第二类多基因病

如癌症、糖尿病、高血压、冠心病、哮喘病等第三类获得性基因病如病毒性肝炎二、反义核酸基因治疗癌症研究现状与展望基因:具有遗传效应的DNA片断人类总基因15.3万个3.8万已肯定11.5万个可能长度为地球太阳来回6次基因组或称词典20bp/second

需11年读完DNA由碱基互补的两条单链组成，模板链称正义链互补单链称反义链反义核酸人工合成一段与靶基因mRNA以碱基互补结合，从而阻断其表达的寡核苷酸序列包括：反义DNA反义RNA核酶AntisenseOligodeoxynucleotidesAS-ODN反义核酸作为基因治疗药物必须具

备的条件1、能进入靶细胞内，并有一定浓度2、细胞内长半衰期3、对抗细胞内、血浆和体液的核酶的降解4、特异性识别靶细胞并稳定结合5、能人工合成6、使用安全有效注意1、AS-OND长度的优化选择16-20bp最佳2、AS-ODN进入靶细胞内的机制蛋白受体介导的

胞吞作用AS-ODN带负电荷3、AS-ODN的修饰和细胞内稳定性甲基磷酸酯硫代磷酸酯肽核酸HOPOOHH碱基HCH2HOOHH碱基HCH2HHOPOX-=O1、新的化学物质——寡核苷酸2、新的药物受体——mRNA3、新的受体结合方式——碱基互补杂交4、新的药物受

体结合反应——RnaseH介导的靶mRNA的降解反义药物与传统药物的不同特异性强准确性高应用前景广阔组织分布除脑以外的所有组织主要为肾肝脾及骨髓AS-PS-ODNBcl-2mRNA抑制细胞凋亡c-mycmRNA细胞增殖和分化c-mybmRN

A(p75)造血细胞增殖和分化MDR1mRNA(p170)多药耐药Bcr-ablmRNA(p210)抗凋亡反义核酸对肿瘤细胞株的作用细胞株:HL-60K562U937原代白血病细胞株:AMLALLAPLCML等反义核酸作用的靶基因:Bcl-2c-mycc-fosc-sycMDRbcr-a

blp53反义药物对实体瘤动物模型的药效学研究动物模型MMP-2PKC-ac-mycPKAI端粒酶RNAC-raf-1PKAbcl-2人结肠癌人膀胱癌人黑色素瘤人肾癌人恶胶质瘤人肺癌人结肠癌肝细胞癌效果预

防肝转移抗癌效果呈序列特异性和浓度依赖性显著抑制肿瘤生长,延长生存期肿瘤生长抑制率为50%肿瘤缩小50%肿瘤生长呈剂量依赖性降低肿瘤生长呈剂量依赖性抑制抑制肝细胞癌生长癌细胞类型靶基因反义药物治疗实体瘤的临床研究ISIS5132C-raf各种实体瘤、淋巴瘤临床II期部分病例延长疾病稳定期7-

10个月ISIS3521PKC-a各种实体瘤,包括卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、脑瘤临床II期部分有效ISIS2503Ha-ras间皮瘤、结肠癌、胰腺癌等临床I期部分病例延长疾病稳定期Bcl-2c-mycc-mybMDR1Bcr-abl的

表达、检测和反义核酸治疗的应用范围略核酶在癌症基因治疗中的应用核酶是指一类具有催化活性的RNA分子可特异性地与靶RNA分子配对，对底物进行切割，促进RNA的降解从而使其失去生物学功能分六类：第一型内含子第二型内含子RnaseP发夹式核酶斧头式核酶锤头式核酶NNNNNNNNNUXNNNNNNN

NNNNNNNNNNACNNNNNNNACAUGAGCGGANNNNNNN催化部分NNNN前臂后臂N:A/C/G/UX:C/U/A切割点1、Kobayashi等MDR1基因转录物核酶导入MOLT3/TMQ800细胞系,对长春新碱的敏感性提了35倍3、将bcr/abl接合区序列的

锤头型核酶的cDNA插入逆转录病毒载体,导入K562细胞,抑制生长,诱导凋亡2、Kashani等对H-ras的核酶导入人膀胱癌细胞株EJ细胞体外生长受抑制,体内致癌性及侵袭力明显下降肽核酸在癌症治疗中的应用反义治疗反基因策略：通过

寡核苷酸与双链DNA结合形成局部的三链结构来抑制基因的转录肽核酸基因原位修复OBOOP=OOOBOOP=OODNABNHNBOOONHNPNA三、基因转移在肿瘤治疗中的应用精确定位：两方面(AFPCEA)有效性：安全性：基因表达

量和持续时间的控制：1、转移基因的要求2、基因转移的载体⑴逆转录病毒载体⑵腺病毒载体⑶腺病毒相关载体⑷物理转移（脂质体、裸DNA、生物枪）逆转录病毒载体只能感染分裂细胞腺病毒载体不能将基因整合到细胞染色体上腺相关病毒载体则避免了上述缺点⑴肿瘤基因的修饰A肿瘤基因的修正修复一个或多个缺陷基因B前体

药物代谢酶TK/GCV系统毒性作用和旁观效应C肿瘤疫苗3、肿瘤基因治疗的策略未成熟树突状细胞提呈成熟树突状细胞第二信号肿瘤细胞消化处理抗原+MHC1,肽复合物共刺激分子基因转移特异抗原或佐剂基因肿瘤细胞分泌细胞因子杀

伤T淋巴细胞毒细胞⑵宿主免疫系统基因的修饰T细胞修饰白血病患者移植物抗宿主反应（+）异基因移植物白血病复发低白血病患者（同卵双生或去除T细胞的病人）白血病复发率高移植物抗白血病作用（GVL）B-细胞+EBVCTL被杀灭免疫缺陷前B细胞逃脱CTL攻击淋巴瘤EBV免疫供

者取外周血CTLGVL⑶改变宿主对细胞毒药物的耐药性用逆转录病毒转移MDR1基因到小鼠祖细胞已证实能减少化疗引起的骨髓移植1、反义药物因有6个条件，具有广阔的应用前景2、肿瘤细胞的死亡应包括坏死和凋亡两个方面3、bcl-2c-mycbcr-

ablMDR1基因并非特异,加之调节多层次网络化,其治疗效果有其局限性小结5、展望肽核酸与DNA形成三链结构4、反义核酸治疗与自杀基因治疗两系统的比较基因原位修复核酶对RNA的特异切割作用传统药物针对蛋白质的功能反义核酸与靶RNA结合ThanksEveryone