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药物制剂质量研究——方法选择与验证12020年3月25日4时3分安全有效质量可控22023年4月1日1时34分、方法学验证产品考察确定质量限度检测方法选择质量目标是/否订入标准QbD终产品工艺研究放行标准关键中间体质控药物质量研究32023年4月1日1时34分药物研发的

要求研究对象是什么？研究目的是什么？如何达到目的？达到何种程度？杂质情况主成分情况安全有效质量可控什么样的药物是安全的？如何证明药物是安全的？什么样的药物是有效的？如何保证药物的有效性？方法选择与验证好药标准情况42023年4月1日1时34分【鉴别】【检查】【含量测定

（效价）】【性状】•外观•色、臭、溶解度•化学•色谱•光谱•杂质的定量或限度检查（有关物质、无机元素、残留溶剂）•制剂中其他成分（降解产物、防腐剂）•溶出度、释放度等功能检查的检测方法•有效成分的含量测定•目视•资料留存•是否专

属•是否存在干扰•内毒素、无菌、微生物限度•其他方法（起码证实方法的专属性）•方法准确性•精密性质量标准中的项目及方法要求52023年4月1日1时34分【鉴别】【检查】【含量测定（效价）】【性状】UV、旋光、密度、熔点化学

、UV、IR、NMR、旋光HPLC、GC、容量法、酶法、生物测定法质量标准中常见检测方法化学、比色、pH、HPLC、GC、TLC、IC、CE、溶出（释放）度、原子吸收、水分62023年4月1日1时34分检测方法选择和设置•任何分析测试的目的都是为了获得稳定、可靠和准确的数据–今天你

“QbD”了么？–本品“仿质量”还是“仿标准”？–质量标准是控制产品质量的基本手段和范围–检测方法是质量标准的手段•仿药典品种如何验证方法？•三类药如何仿？–进口注册标准–国外药典–我该用什么方法。。。。？•创新药的检测方法如何选择？72023年4月1日1时34分仪

器有确定的技术指标，经过检测证实其适用于需要验证的方法证明方法能够实现预期目的，按预期要求运行证实系统运行能够达到预期目标，得到准确实验结果证明样品分析结果的准确性系统适用性试验质量控制检查分析仪器确认分析方法验证影响数据质量的因素820

23年4月1日1时34分检测方法的选择适用性先进性经济性通用性方法与技术的“更新换代”方法能够满足实验室间方法传递的要求方法能够充分反映质控目标方法准确、灵敏、简便、易行92023年4月1日1时34分含量和杂质分析方法的选择•含量与杂质分析是否

采用同一个条件–HPLCorUHPLCor2DLCorGC–正相or反相orHILIC–ICorCEor离子对•含量与杂质采用何种检测器–UV检测器是否ok–折光、ELSD、CAD、NQAD–CD、ED–MS？•前处理方法是否有效？102023年4月1日1时34分药物有效性的基石-对照品

•理化检测用国家药品标准物质系指用于药品质量标准中物理和化学测试用，具有确定特性，用以鉴别、检查、含量测定、校准设备的对照品。•《国家药品标准物质管理办法》2011.10.1•《国家药品标准物质研制技术要求》•一级国家标准物质——具有很好的质量特性，其特性量值采用定义法或其他精准、可靠

的方法进行计量•二级国家标准物质——具有良好的质量特性，其特性量值采用准确、可靠的方法或直接与一级标准物质相比较的方法进行计量。112023年4月1日1时34分国家药品标准物质分类化学对照品生物标准品生物参考品

对照药材/对照提取物体外诊断试剂标准品药用辅料对照品药包材对照物质122023年4月1日1时34分国家药品标准物质1.含量测定用化学对照品：系指具有确定的量值，用于测定药品中特定成分含量的标准物质。2.鉴

别或杂质检查用化学对照品：系指具有特定化学性质，用于鉴别或确定药品某些特定成分的标准物质。3.对照药材/对照提取物：系指用于鉴别中药材或中成药中某一类成分或组分的对照物质。4.校正仪器/系统适用性试验用对照品：系指具有特定化学性质用于校正检测仪器或供系统适用性实验用的标准物质。供鉴别用供检查用供

含量测定用供系统适用性用132023年4月1日1时34分对照品的特点均匀量值准确稳定142023年4月1日1时34分药品标准物质研制管理机构药典管理机构品种中国药典中国食品药品检定研究院（NIFDC）2780国际药典（Ph.Int）WHO委托欧洲药事管理局（ED

QM、NIBSC）542美国药典（USP）美国药典会（USP）3048欧洲药典（Ph.Eur）欧洲药事管理局（EDQM）2548英国药典（BP）英国药典会（BPCL）英国政府化学分析实验室（LGC）3109日本药典（JP）日本公定书协会（PM

RJ）246152023年4月1日1时34分对照品（标准品）、工作对照品、杂质对照品•对照品——用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质。•标准品——用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。•一级对照品——在特定的背景下具有适宜的质量、其量值不需

要再与另外的标准物质进行对比的对照品•二级对照品——经与一级对照品对照而得来的对照品。确证的范围及检测的程度小于一级对照品。（亦称：工作对照品）•杂质对照品162023年4月1日1时34分标准物质建立的要求•制备•标定•保存和分发•质量标准中收载的标准物质需要具有可行性和适用性•可大量制

备高纯物质•方法专属性强•稳定性良好•质量标准合理、可靠172023年4月1日1时34分对照品标定程序及项目182023年4月1日1时34分标化方案起草•查阅各国质量标准•原料的检验报告•原料的稳定性数据及引湿性•

确定对照品用途，了解原料性质•制定标化项目及要求•形成初稿，负责人审核192023年4月1日1时34分标化项目——无国家对照品的品种•性状（比旋度）•鉴别（MS、IR、NMR、UV）•检查–有关物质（国内外药典方法）–水分/干燥失重–残留溶剂–炽灼残渣•含量测定（对标、容量法）202023

年4月1日1时34分标化项目——有国家对照品的品种•性状&鉴别•检查–有关物质–水分/干燥失重•含量测定（对标法）◆当国家对照品换批时，必须重新标定◆三个实验室的数据212023年4月1日1时34分对照品标定项目•首批–U

V–IR–NMR–MS–元素分析–X-ray衍射–官能团分析•常用–HPLC（DAD）–GC–TLC–CE–DSC–相容度法–UV、IR、NMR–容量法–旋光度–水分、残留溶剂、干燥失重222023年4月1日1时34分标化实验•如实记录实验过

程中的现象–溶解过程，溶液状态•有关物质计算方式–归一化法–自身对照法–外标法232023年4月1日1时34分•HPLC有关物质：平行2份•干燥失重：精密称定2份，每份称样量约1.0g•水分：分装前平行3份；分装后取X支•炽灼残渣：1份•引湿性：DVS/药典附录引湿性•含量测定：对照品和原

料各平行2份，每份不低于20mg242023年4月1日1时34分分装•分装条件的确定–引湿性–用途–使用方式•分装记录–温湿度–数量•分装后均匀性的考察–水分–有关物质252023年4月1日1时34分•包装容器必须能够保证内容物的稳定性–玻璃（塑料）安瓿主

要用于易氧化及液体原料–常规品种可采用西林瓶包装–对于易于氧化或潮解的品种，必须控制分装间的湿度并在氮（氩）气氛围下分装•最小包装单元的实际装量与标示的装量应符合规定的允差要求，固体原料的装量一般为标示量的±10%262023年4月1日1时34分标化报告（一）概述（二）

原料的来源与检验（三）结论272023年4月1日1时34分标化报告（一）概述–类别–各国药典收载情况：EP、USP、JP–国内药品标准–结构式、分子式、分子量282023年4月1日1时34分（二）原料检验：1.性状根据质量标准项下的描述判定质量的优劣；若没有质量标准，也要

将样品实际性状记录下来理化性质：比旋度、折光系数、引湿性等2.鉴别结构确证：UV、IR、NMR、MS、元素分析、X衍射、HPLC/TLC/GC鉴别、关键官能团的专属性鉴别标化报告292023年4月1日1时34分3.检查➢纯度TLC、HPLC、GC、DSC➢

干燥失重或者水分➢残留溶剂➢炽灼残渣4.含量测定➢容量法➢UV法➢HPLC法标化报告302023年4月1日1时34分定值方法312023年4月1日1时34分影响对照品准确定值的因素•HPLC纯度•水分•炽灼残渣•残留溶剂•引湿性•稳定性32202

3年4月1日1时34分稳定性考察•先密后疏原则•考察项目–有关物质–水分/干燥失重–含量测定•可接受的变化限度332023年4月1日1时34分对照品的使用的注意事项使用方式➢本品使用前不需处理，可直接使用➢X℃干燥3小时后使用➢使用时自测水分注意事项：–开瓶后一次使用完毕–仅供国家

药品标准规定项下使用–说明书网上下载，按说明书操作–更换新批次后，根据品种监测情况，一般对上一批次设置3-6个月仍可使用的缓冲期342023年4月1日1时34分对照品局限性•尽管同一批对照品不同标定方法的含

量有很好的相关性，但并不完全相同，有时差别会很大。•如：头孢呋肟酯对照品，HPLC标定为96.9%，供含量测定用；UV为98.8%，供溶出度测定。•中国药典凡例明确规定Chp对照品仅用于正文中所规定的分析方法。•常将含

量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起问题！352023年4月1日1时34分效期和说明书•中国药品生物制品检定所提供的标准品大部分均无使用说明书和使用期限。•大都沿用新的批号出现、旧的批号自动停止的管理方式。362023年4月

1日1时34分二级对照品（工作对照品）的标定•一级对照品的规格小、价格高、购买周期长的缺点，对于实验室对照品用量大的企业来说，使用二级对照品成了实验室的首选。•选定样品——优质，高纯•标定样品——选择

“合理”的方法•标定1——3人、3样、3机。RSD应小于0.5%（HPLC法）•标定2——建议按照“新”对照品标定一次，与“对标”结果应相符。•分装——西林瓶，单次使用量，一次用完。•效期——1或2年（据稳定性数据

），不超过样品效期•储存——2~8℃•期间核查——半效期372023年4月1日1时34分杂质对照品•是否需要设置杂质对照品–外标法定量？自身对照行不行？加校正因子行不行？–系统适用性（定位）？相对保留时间行不行？

降解能否获得？是否有相似替代品？–技术门槛？！•杂质对照品的研制–获得方式：定向合成、富集纯化、分离纯化–结构确证–纯度检查–是否稳定，能否满足长期供应？382023年4月1日1时34分“量体裁衣”方法学验证39

2023年4月1日1时34分方法验证的步骤•USP<1225>规定实验室应采用试验方式进行方法验证：“应通过实验室的研究制定成一定的分析方法验证程序，证明方法的性能参数符合预期的分析应用要求。”•验证过程应满足以下条件：易于使用；能够用计算机系统自动控制；每次分析的

成本；样品能量；运行时间；以及环境、健康和安全要求402023年4月1日1时34分分析方法验证的法规要求•方法验证的目的——证明所采用方法适合于相应检测项目的要求，能够真实反映产品质量，做到质量可控！•新分析方法用于常规检测前必须验证•方法转移到新的实验室后需要进行重现验证（或方法确

认）•新药申报，质量标准中的分析方法必须验证！•生产工艺变更、制剂组分变更、分析方法修订时，质量标准中的分析方法必须验证！•方法验证的指导原则–《中国药典》2010年版二部附录XIXA（只有项目没有标准）–ICHQ2（A/B）–FDAcGMPs211.16

5，211.194–USP通则<1225>,<1226>,<621>412023年4月1日1时34分验证项目及内容•不同项目验证内容不同！•以证明方法适用为根本目的！项目内容鉴别杂质定量测定杂质限度检查含量测定及溶出度测定准确度－+－+精密度－－－+重复性－+－+中间精密

度－+①－+①专属性②＋＋＋＋检测限－－③＋－定量限－＋－－线性－＋－＋范围－＋－＋耐用性＋＋＋＋①已有重现性验证，不需验证中间精密度。②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。③视具体情况予以验证。4

22023年4月1日1时34分含量测定方法验证接受标准–容量分析法：原料药精制品（＞99.5%）或对照品考察精密度RSD≤0.2%；回收率99.7~100.3%–UV法：精制品考察精密度RSD≤1%；制剂回收率98~102%；线性吸光

度在0.2~0.7，r＞0.9999(n≥5)，截距近于零。–HPLC法：精制品考察精密度RSD≤2%；制剂回收率98~102%；线性r＞0.999(n≥5)，截距趋于零432023年4月1日1时34分方法验证的步骤•初步确定分析方法•制定验证方案–验证目的、验证项目、接受标准

–准备仪器设备、原料、对照品–人员准备、文献材料调研•开展验证•收集实验记录和图谱•提交验证报告•评价方法是否通过验证442023年4月1日1时34分方法验证的筹备——防止不必要的失误•用于测定关键验证参数的化学品，应具备足够的数量，足够

稳定，并且按照技术指标核查其具有确切的成分和纯度。•其他材料和消耗品也应符合要求。应选用新的并且符合色谱柱性能指标要求的色谱柱（防止材料导致的失败）•分析设备应有明确的规定和良好的性能，并经过确认或校准，以确保其满足分析方法要求的功能和性能指标。•应选

择中等性能的设备，而不要选择性能最好的设备。否则，用不同设备进行中间精密度和重现性研究时可能会有问题，不容易满足标准限度的要求。•操作人员应对技术和设备足够熟悉。这样，他们可以更容易地识别和诊断不可预见的问题，并且更加高效地完成整个过程。452023年4月1日1时34分分析方

法验证顺序没有标准程序！耗时最长的实验放在最后！1.专属性2.重复性（RT、Area）3.线性、定量限、检测限、范围4.准确度5.中间精密度（重现性）6.耐用性部分数据可以套用！说法不一！斟酌考虑！462023年4月1日

1时34分方法验证项目的要求——保证分析方法能够用于在研药品的质量控制•专属性——有其他成分（杂质、辅料等）存在时，拟定的方法能否准确（分离）测定出被测物；反映方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力；指用于复杂样品分析时是否受到相互干扰。•分别分析加有杂质、

降解产物等控制成分的样品和实际样品，比较两组测试结果–空白无干扰–主成分与有关物质完全分离（分离度r≥1.5）–峰纯度符合规定（≥980）•考虑基质(辅料、水、食品等)对专属性的干扰，关注样品制备减少干扰的发生。472023年4月1日1时34

分方法验证项目的要求——专属性•鉴别–与可能的共存物或结构相似物质相区别–空白辅料、结构相似物以及其他组分均呈负反应•含量测定、杂质检测–提供代表性色谱图–表明各组分（成分）位置–分离度符合规定–含量测定供试品中加入杂质，考察对测试结果的影响(杂质定位)

–杂质测定供试品加入杂质，考察杂质间的分离情况482023年4月1日1时34分降解试验以及降解途径的研究•降解条件选择–酸、碱、氧化•浓度、温度、时间–高温、光照•时间、光强•分离条件的优化–峰纯度–分离度–主要降解杂质鉴定•降解程

度控制–降解10~20%–至少有一个条件降解•与非降解品比较；体现考察摸索和研究的过程492023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——专属性•尝试选择合适的色谱柱或色谱条件获得方法的专属性•评价目标色谱峰纯

度（二极管阵列检测器、MS）•当共洗脱化合物的光谱图非常接近时，紫外-可见二极管阵列检测器就有其局限性，这在代谢物及其母体化合物时极有可能发生502023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——专属性•当共洗脱化合物的光谱图非常接近时，采用MS检测器•质谱

通常比紫外光谱专属性更强，因此常用于色谱的选择性评价512023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——专属性猪去氧胆酸+胆酸胆酸RT:0.00-40.00024681012141618202224262830

32343638Time(min)05101520253035404550556065707580859095100RelativeAbundance15.5715.4615.7314.3415.8914.2016.1513.3116.4417.4918.757.0425.8512.7

821.499.838.7224.2826.9328.9832.465.964.943.222.0036.7238.5935.86NL:1.19E7BasePeakF:ITMS-cESIFullms[50.00-1000.00]MSdansuan+

zhu2m/z=391.44猪去氧胆酸m/z=407.43胆酸m/z=407.38胆酸异构体？胆酸猪去氧胆酸522023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——系统适用性•系统适用性–6份供试品溶液–响应因子RSD≤2.0%–主峰保留时间RSD≤1.0%

–主峰拖尾因子≤2.0（0.95~1.05）–主峰与杂质峰基线分离（α≥2.0）–理论板数符合规定532023年4月1日1时34分方法验证项目——准确度542023年4月1日1时34分方法验证项目——准

确度原料药•利用已知纯度的对照品或样品进行测定•与已建立准确度的另一方法测定结果进行比较（容量法！）制剂•空白辅料+对照品•制剂+对照品（无法获得空白辅料）552023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——精密度•精密度——同一样品多次测定结果的接近程度–重复性•6份供试液

（100%浓度），含量RSD≤2.0%（n=6）•检测范围内，3水平，9样品测定（回收率结果）–中间精密度（与重现性“二选一”）•6份供试液，双人双机分别测定，含量RSD≤2.0%（n=12）•人员、仪器、操作

条件、试剂、色谱柱等因素影响–重现性•不同实验室，不同人员测定结果的精密度（方法通用性，方法转移）准，不精不准，精准，精562023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——灵敏度（检测限）•检测限——被测物

能够被检测出的最低浓度或含量。–限度指标，无需定量。–目视法：能够可靠检出的被测物的最低浓度或含量(结果记录！)–信噪比法：仪器分析法(计算基线噪音)，s/n≥3–标准差法(I)：A≥3δ(n≥6)A:平均峰面积；δ：偏差–标准差法(II)：•空白=0：测背景噪音(n≥10

)，计算标准差δ；计算标曲上3δ对应的浓度，即为检出限•空白＞0：测背景噪音(n≥10)，计算标准差δ；计算标曲上(Y截距+3δ)对应的浓度，该浓度即为检出限•空白＜0：测背景噪音(n≥10)，计算标准差δ；计算标曲上3

δ对应的浓度，X截距+该浓度即为检出限572023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——灵敏度（定量限）•检测限——被测物能够被定量测定的最低浓度或含量，结果应准确和精密。–信噪比法：仪器分析法(计算基线噪音)，s/n≥10–标准差法：A≥10δ(n

≥6)A:平均峰面积；δ：偏差–六份定量限溶液，主峰保留时间RSD≤2.0%；主峰峰面积RSD≤2.0%–工作站计算信噪比，注意选取参比时间–色谱图显示s/n582023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——线性•线性——被测物浓度与结果之间

呈正比关系的程度•回归方程（最小二乘法；一次、二次、双对数）–80%~120%；定量限~120%–n≥6（至少五个点，均匀分布）–r≥0.998–Y截距在100%响应值的2%内–响应因子RSD≤2.0%592023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——范围•范围–达到一定精密度、准确度和线性下

，测试方法使用的高、低浓度或量的区间–根据分析方法具体应用和线性、准确性、精密度验证的结果和要求确定–一般用与检测结果相同的单位表述（百分比、百万分之几）。–含量测定：80%~120%–含量均匀度：70%~130%–杂质：报

告值（定量限）~限度120%–溶出度：范围±20%（下限-20%~上限+20%）10012080精密度范围602023年4月1日1时34分方法验证项目的要求——耐用性•耐用性——实验条件略有变动，是否影响检测结果；衡量城规情况下实验结果的重现性；如方法易受影响，应着重注明！–关注溶液稳定性

影响（不同储存时间的样品和对照品溶液与新制备对照品溶液的比对结果分析）–关注提取条件影响！–常规考察：流动相比例变化(±5%)、pH变化(±0.2)、柱温变化(±5℃)、流速变化(±20%)、检测波长（±2nm）–色谱柱：同品牌不同批

号–每条件测试2次–拖尾因子≤2.0–主峰与杂质峰基线分离–各条件含量数据RSD≤2.0%612023年4月1日1时34分方法确认和转移•方法验证主要在产品开发阶段完成•生产后的验证包括方法确认和方法转移•方法确认——本

单位生产的产品是否符合变更后的国家标准或药典标准–关注新旧方法的区别–确认新方法的接受标准–对实际样品和稳定性样品进行考察•方法转移——研发单位转移方法至接受单位（生产单位）622023年4月1日1时34分恰当的方案适用的方法精密的验证优质的产品632

023年4月1日1时34分杂质谱分析•根据主成分及杂质的理化性质、化学结构、杂质的控制要求，采用适当手段将杂质的信号放大，易于辨认和定量。•化合物结构特征、理化性质、剂型特征、工艺过程、标准要素…•综合设计、

严谨研究、规范验证。•专属、灵敏、准确、简捷。•分析方法各有局限，注意不同原理分析方法间的相互补充和验证。•杂质谱研究遵循原则：质量守恒！642023年4月1日1时34分杂质谱分析——方法建立•方法的选择–不同原理方

法比较–方法的最优化•色谱系统选择–杂交色谱（柱串联）–二维色谱–新技术应用（HILIC）•检测器的选择–UV、DAD/ELSD、CAD、NQAD–IR/MS652023年4月1日1时34分杂质谱分析——杂质比较与谱峰归属•比较方法–图谱叠加–平行列表–逐峰比较•结果报告–新杂质（个数、

单个最大、总量）–单一新杂质量（0.1%？、0.2%？）–新杂质总量所占比例峰序号溶剂峰对照药自制品峰性质新增杂质总量10.20.20.2溶剂峰24.2/0.2%新增杂质38.2/0.5%8.2/0.3%原有杂质411.8/

0.5%苯乙胺518.2/0.5%新增杂质（苯乙醇）杂质总量1.2%1.0%0.7%662023年4月1日1时34分杂质谱分析——阿奇霉素中可能的杂质：37种•原料：–红霉素A、红霉素B、红霉素C、红霉素D、红霉素E、红霉素

F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F•中间体：–红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红霉素C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺•副产物：–红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉

素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氢阿奇霉素、O-甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3’-N，N

-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯•降解产物：–去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8，9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮系统图实际图67202

3年4月1日1时34分杂质研究关键点——方法合理性色谱方法（HPLC、TLC、GC）•HPLC：–杂质是否有UV吸收(检测器的选择)、–溶液是否稳定、–方法本身是否引起药物降解•TLC：–固定相的选择–显色方式（

UV吸收的差异、显色剂灵敏度的差异）–溶液是否稳定–薄层固定相是否会引起药物的降解检测手段•检测器–DAD/UV–ELSD/CAD/NQAD–IR/MS•首选DAD检测器，考虑”通用”检测器–检出杂质的数与量–干扰因素–操作的便捷性•除非GC，不建议衍生

化682023年4月1日1时34分杂质研究关键点——建立的方法能否有效检出所有杂质？•HPLC洗脱方法的选择---等度洗脱or梯度洗脱•等度洗脱——极性大的化合物可能被掩盖；极性小的化合物难以被洗脱，甚至保留在柱上•梯度洗脱——杂质研究中值得借鉴的手段；有效检出极性相差悬殊的系列

杂质验证等度洗脱法对各类杂质的检出能力原方法新方法分离方法的选择！692023年4月1日1时34分杂质研究关键点——测定值是否真实反映杂质的含量？•申报资料中“HPLC检测波长的选择”问题(a)直接将主药的最大

吸收波长选作检测波长;(b)简单地套用含量测定的色谱条件。实际仍是以主药的最大吸收波长作为有关物质检测波长;(c)以样品进行破坏性试验（酸、碱、热、光照、氧化等）后的溶液做紫外扫描。由于未破坏主药所占比例较大，故破坏性试验后溶液的最大吸收波

长一般仍为主药的最大吸收波长。•若盲目地将主药的最大吸收波长确定为检测波长，则杂质在此波长下的吸收可能偏低；某些杂质甚至无吸收，这样会造成对杂质含量的低估甚至漏检，从而不能反映产品的真实质量。•无紫外吸收或检测波长处吸收相差较大的多种化合物，有时在单一

检测波长处不能检出检测方法的选择！702023年4月1日1时34分杂质研究关键点——测定值是否真实反映杂质的含量？HPLC波长选择解决方案•对产品中可能存在的杂质（合成原料、中间体、副产物以及降解产物）的紫外吸收特性进行研究。–已知杂质的紫外吸收特性可采用对其流动相溶液直接进行扫描的方法考察

;–未知杂质（如未知降解产物等）可通过二极管阵列检测器考察其紫外吸收情况。•根据各主要杂质及主成分的紫外吸收特性，选取响应值基本一致的波长作为有关物质的检测波长。–若对不同杂质难于找到均适宜的检测波长：•选择在不同波长下分别测定，•采用加校正因子的主

成分自身对照法。•改用通用检测器（ELSD、CAD、NQAD）杂质研究首选HPLC-DAD；建议HPLC-DAD-CAD联用！712023年4月1日1时34分杂质研究关键点——多种方法联用•由杂质多样性复杂性和

方法局限性所决定。•单一方法不能满足多个杂质的检测时，可采用两种或两种以上的方法互为补充。–化学法、色谱法、光谱法、生物检定法–同一方法采用不同的测试条件，如正相HPLC、反相HPLC、不同流动相的反相HPL

C等–分离技术与检测手段联用，较为有效，如HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、HPLC-DAD、CE等–多维色谱（HPLC-IC）–多检测器联用（LC-DAD-CAD-MS）722023年4月1日1时34分杂质研究关键点——检测方法的规

范性验证•专属性：原料药合成中间体、粗品等的分离度考察–原料药及制剂的强制破坏实验–制剂辅料干扰实验–杂质加入实验–与药典或经过论证的其他方法比较–峰纯度检测（DAD/MS）732023年4月1日1时34分杂质研究关键点——检测方法的规范性验证•灵敏度：通常用检测限及定量限表征–直观评价、信

噪比、响应值的标准差和斜率获得。–关注杂质紫外吸收特性，确定适宜波长；–判断是否需要采用杂质对照品•精密度：–重复性(在相同条件下由同一分析人员测定所得结果的精密度)–中间精密度(在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的

精密度)–重现性(在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度)742023年4月1日1时34分杂质研究关键点——检测方法的规范性验证•准确度：–已知杂质：回收率（根据精密度、专属性、线性）推断–未知杂质：与另一成熟

方法比对、根据质量平衡原理结合含量等结果进行粗略判定，必要时研究几种不同色谱条件甚至不同测定原理的方法进行比较选用•线性：在设计范围内，响应值与待测物质量之间成正比例关系的程度。•范围：检测方法能达到一定精密度、准确度和线性的高、低浓度或量的区间–范围应在

规定限度的±20%间或定量限至限度的+20%间，若含量测定和杂质检查同用一套色谱系统，则线性范围应为杂质限度的-20%至含量限度（上限）的+20%间•耐用性：指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度752023年4月1日1时34分杂质研究关键点——定量

方法的选择杂质对照品法加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法峰面积归一化法优点定量准确定量准确，无需长期提供对照品可用于未知杂质简便特点需用杂质对照品杂质与主成分的响应值超出0.9~

1.1范围，宜采用杂质对照品法计算含量假定杂质与主成分的响应因子基本相同，响应因子在0.9~1.1之间可用；有一定误差；响应因子不同、线性范围不同、仪器积分精度及准确度不同等影响，有局限性对象已知杂质已知杂质已/未知杂质已

/未知杂质762023年4月1日1时34分杂质研究关键点——限度的确定•杂质限度:药品质量控制的重要指标之一，临床用药的安全性的重要保障；反映药品生产工艺水平、产品的稳定性、有效期的重要指标。•基本原则：在可行的范围内尽可能低。•限度确定的核心：杂质是否安全！–指导原则（决策树）–杂质安全性研

究相关文献资料–杂质安全性研究资料–被仿品质量标准中杂质“数”和“量”的情况–上市品杂质不得超过安全性研究样品中杂质水平772023年4月1日1时34分残留溶剂分析•原料药、辅料或制剂生产过程中使用或产生的在工艺过程中未能

完全去除的有机溶剂•根据毒性分为四类–一类溶剂——致癌物、意思致癌物或环境危害物必检–二类溶剂——非遗传致癌毒性或其他不可逆毒性或严重的可逆毒性必检–三类溶剂——低毒研究终产品精制步骤的残留–四类溶剂——无足够资料782023年4月1日1时

34分残留溶剂的特点•有机挥发性化合物•药品生产过程中使用过•生产中应除去而未除尽•种类相对固定•不同样品、不同产地、不同工艺具有不确定性•残留量相对较低•同一样品中不同溶剂残留量相差较大792023年4月1日1时34分残留溶剂的研

究过程•确定研究溶剂种类•确定溶剂类别•确定限度•选择测定方法–干燥失重/GC/HPLC(吡啶)/IC(N-甲基吡咯烷酮)/GC-MS•选择色谱柱和检测器•方法建立及条件优化•方法学验证•建立质量标准802023年4月1日1时34分残留溶剂分析方法•首选方法——GC•

顶空进样VS直接进样•毛细管柱VS填充柱•FID检测器•极性柱VS非极性柱（DB624）•等温VS梯度升温812023年4月1日1时34分残留溶剂分析方法直接进样•高沸点溶剂•水或其他挥发溶剂顶空进样•低沸点溶剂，样品干扰测定•水、不挥发性酸碱•DMF、DMSO82残留溶剂方法验证

•专属性•系统适用性•线性（定量限~限度+20%）•精密度•LOD&LOQ•准确性（回收率）•耐用性83残留溶剂方法验证•强烈建议：做一次GC-MS；–不要尽信溶剂供应商的纯度信息！–不要尽信工艺信息–不放过任何一个信号峰–辅料的

溶剂残留必须考虑–方法不能照搬药典！•内标干扰•溶剂差异84谢谢！85