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项目3：发酵技术生产生物药物任务1：发酵法生产白细胞介素项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)1教学安排：1.员工培训由老师讲解白细胞介素-2生产的理论基础。分配实操任务：白细胞介素发酵生产。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生

产白细胞介素(1)22.学生模拟组建运营一个白细胞介素-2生产企业，撰写计划书(在理论教学期间完成)。市场部：白细胞介素-2的结构、功能、用途，白细胞介素-2市场状况与销售预测，竞争对手状况与分析。技术

部：确定白细胞介素-2生产的工艺流程及工艺参数，编制生产操作规程，确定生产车间的布局。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)3品控部：制定白细胞介素-2的质量标准，生产取样分析操作规程，质量检测标准和操作规程。总经理：协调监督各部工作，最后拿出完整的计划书。项目3

发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)43.计划书实施。计划书要先经过老师的审核，然后实施。实施过程中考核操作技能。实施后及时进行实训报告的撰写也总结。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)5⚫一蛋白质类药物⚫1蛋白质类激素⚫

垂体蛋白激素和促性腺激素。⚫2血浆白蛋白⚫3蛋白质类细胞生长调节因子项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)6⚫4黏蛋白。⚫5胶原蛋白。⚫6碱性蛋白质。⚫7蛋白酶抑制剂。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)

7⚫二、生产用微生物的来源及发酵特性⚫1大肠杆菌宿主菌特点⚫优点：遗传背景清晰，容易培养；⚫缺点：形成包涵体；不能修饰蛋白。⚫表达形式温度敏感型乳糖诱导型项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)8⚫2酵母宿主菌特性⚫优点：可对蛋白修饰；蛋白折叠正确；⚫缺点：生产较慢。常用甲醇诱

导型。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)9⚫3基因工程菌发酵控制要点⚫(1)培养基⚫兼顾生长与外源基因表达。⚫(2)接种量⚫接种量适中，影响生长速度和迟滞期的长短。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(

1)10⚫(3)温度⚫影响酶活性。⚫(4)溶解氧⚫维持较高DO值。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)11⚫(5)诱导时机⚫微生物生长旺盛后。⚫(6)pH⚫根据生长期与生产期的需求控制。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)12⚫三、白

细胞介素的结构与功能⚫Interleukin，简称IL。⚫目前批准上市的有IL-2、IL-6、IL-12等。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)13⚫IL-2分子量为１４５００的糖蛋白，它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的Ｔ细胞增殖。重组白介素－２可用于

临床研究。主要用于肾癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Ｒｏｓｓｅｎｂｅｒｇ）。ＬＡＫ细胞代表１个有单核巨噬细胞，Ｂ和Ｔ淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些ＬＡＫ细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外，ＬＡＫ细胞（不象Ｔ

细胞）介导杀伤不受ＭＨＣ的约束。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)14⚫四、生产工艺⚫1工艺流程图项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)15IL-2工程菌斜面摇瓶发酵

制备包涵体洗涤与裂解凝胶过滤与复性检定与包装项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)16⚫2生产过程及工艺过程⚫(1)发酵⚫工程菌为大肠杆菌，温度敏感型。⚫种子用LB培养基；⚫发酵用M9CA培养基，30度10小时，后提高温度至42度，诱导3h。项目3发酵技术生产生物

药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)17⚫(2)分离纯化⚫包涵体制备⚫离心收集，菌体悬于EDTA溶液中，用超声波破碎细胞，后8000r/min离心，收集沉淀(包涵体和细胞碎片)。项目3发酵技术生产生物药物

任务1发酵法生产白细胞介素(1)18⚫包涵体洗涤及裂解：⚫⚫用Tris-HCl洗涤3次，离心收集沉淀，用盐酸胍变性，离心收集上清液。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)19⚫凝胶过滤及复性：⚫上清过SephacrylS-200柱，醋酸液洗脱，收集洗脱峰。

⚫干燥：⚫用冷冻真空干燥。项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素(1)20⚫作业：⚫1蛋白药物有哪些种类？⚫2大肠杆菌与酵母宿主菌各有何特点和表达类型？⚫3白细胞介素-2有何功能与用途？⚫4白细胞介素生产工艺如何？项目3发酵技术生产生物药物任务1

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