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PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较HPLC法在国内外药典中的应用与比较PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较汇报的主要内容u一、简述u二、高效液相色谱仪u三、系统适用性u四、色谱条件的调整u五、HPLC的应用及方法开发PPT文

档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较一、简述u《中国药典》2010年版二部共收载2271个品种，新增品种330个，修订品种1500个，涉及HPLC检测项目的品种有1291个，占总品种的57%，其中新增/修订926个

。uHPLC法在整个药典品种的检验中占有重要地位。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较uHighPerformanceLiquidChromatography简称HPLC，开始应用于20世纪60年代后期，现已趋于成熟，广泛应用于医药

、生化、天然产物主要组分分析，以及食品、化妆品分析，环境分析，农业分析，石油化工分析等。u优点：高压+高速+高效+高灵敏度一、简述PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较uCHP(2010)：《中国药典》201

0年版uUSP：UnitedStatedPharmacopoeiauEP：EuropeanPharmacopoeiauJP：JapanesePharmacopoeia一、简述PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较定义uCHP(

2010)附录VD：HPLC系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。uUSP(32)<621>：High-pressureliquidchromatography(HPLC),

sometimescalledhigh-performanceliquidchromatography,isaseparationtechniquebasedonasolidstationaryphaseandaliquidmobilep

hase.Separationsareachievedbypartition,adsorption,orion-exchangeprocesses,dependinguponthetypeofstationaryphaseused.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与

比较定义uEP(6.0)2.2.29：Liquidchromatographyisamethodofchromatographicseparationbasedonthedifferenceinthedistributionofsp

eciesbetweentwonon-misciblephases,inwhichpercolatesthroughastationaryphasecontainedinacolumn.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较定义u

JP(XV)2.01：Liquidchromatographyisamethodtodevelopamixtureinjectedintoacolumnpreparedwithasuitablestationaryphasebypassingaliquid

asamobilephasethroughthecolumn,inordertoseparatethemixtureintoitscomponentsbymakinguseofthedifferenceofretentioncapacitya

gainstthestationaryphase,andtodeterminethecomponents.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较二、高效液相色谱仪u基本组成：PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较泵CHP(201

0)USP(32)EP(6.0)JP(XV)未解释满足等度和梯度洗脱;压力：5000psi或更高;最大可达10ml/min可满足等度或梯度洗脱只强调了恒定速率•泵的种类很多，目前应用最多的是柱塞往复泵（恒流泵）P

PT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较进样器CHP(2010)USP(32)EP(6.0)JP(XV)未解释微量进样器定量环自动进样器手动/自动强调重复性好即可PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用

与比较色谱柱—分离的核心uCHP(2010)附录：u1.正相：硅胶柱；u反相：C-18柱、C-8柱；u2.粒径：普通3～10μm；<2μm（亚-2μm仅能用于UPLC）；u3.温度要求：以硅胶为载体的通常<40℃；不宜超过60℃；u4.pH要求：2～8；•<2，化学键合

相脱落•>8，硅胶溶解以5μm最为常见PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较u色谱柱技术发展很快，新填料新技术也不断涌现，给我们提供了更多的选择。uGemini-NXC18柱：色谱柱◼乙烷交联，抵抗高pH侵蚀◼多点配体键

合，抵抗低pH下配体水解◼pH1~12稳定！◆KinetexC18柱：通过核-壳颗粒技术，使颗粒减小到2.6μm，而无需高压即可达到提高速度、分离度和灵敏度的效果。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国

内外药典中的应用与比较色谱柱uZorbaxStableBond柱：u采用了较大的二异丁基(SB-C18)或二异丙基(SB-C8、SB-C3、SB-Phenyl、SB-CN、SB-Aq)侧链基团和空间位阻，避免了在低pH条件下

的水解破坏，其pH1.0~8.0，温度上限也可达到80~90℃，甚至在100%水相中也有出色的表现。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较色谱柱uZorbaxExtendC18柱：u采用独特的双配位C18-C18键合

技术，使的在高pH条件下使用硅胶基色谱柱成为可能，在pH2~11.5的范围内是稳定的。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USP(32)<621>:uStationaryphasesformodern,reverse-phaseliquidchromat

ographytypicallyconsistofanorganicphasechemicallyboundtosilicaorothermaterials.u1.Particles：usually3to10mindiameter；mayrangeupto5

0mormoreforpreparativecolumns.u2.Internaldiameters：usually2to5mmforanalyticalseparation，lagerforpreparativechromatography.u3.Temperature

:onlyrarelyabove60℃；u4.根据填料不同，USP在ChromatographicreagentsintheReagents,Indicators,andSolutionssection列出了USP-NF所用到的不同类型的柱子，如下所示:•C-18•硅胶柱•C-8•NH2柱•阳

离子交换柱•（SCX）•CN柱•苯基柱•阴离子交换柱•（SAX）◆L57~L67未列出PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较EP(6.0)2.2.29：◆大部分分离机制都是基于以化学键合硅胶作为固定相，极性溶剂作为流动相的色谱条件。而化学键合相的性质往

往决定了色谱系统的分离性能。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较➢particlesize：3~10μm➢internaldiameters：prescribedinthemonograph,eg:➢pH：silicabasedreversed-phasec

olumnsareconsideredtobestableinmobilephaseshavinganapparentpHintherange2.0to8.0.➢temperature:notbeheatedab

ove60℃➢Special：EP(6.0)2.2.29：◆stationaryphasedegradetion◆compositionofthemobilephasePPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较EPuMannitolAssay

:PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较JP(XV)：uAcolumnwithastationaryphasechemicallyboundontheinsidewallinsteadofthecolu

mnpackedwiththepackingmaterialmaybeused.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较检测器➢CHP(2010):➢UV➢DAD➢FLD➢ECD➢ELSD➢RID➢MS◆优点：灵敏度高、噪音低、线性范围宽、对流速和温度的波动不灵敏

，适用于梯度洗脱及制备色谱。◆缺点：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的选择有一定限制，流动相的截止波长必须小于检测波长。◆适用范围：大多数有紫外吸收的化合物。◆优点：通用型检测器，对各种物质有几乎相同的响应。◆缺点：灵敏度相对较低，流动相必须是挥发性的，不能用非挥发性的缓冲盐及表面活性剂。◆适用

范围：适用于挥发性低于流动相的组分，主要用于糖类、高级脂肪酸、磷脂、维生素、氨基酸、甘油三酯、皂苷及甾体等等无紫外吸收或紫外末端吸收的化合物的检测。◆优点：灵敏度高、选择性好，是微量组分和体内药物分析常用的检测器之一。◆缺点：只适用于能够产生荧光的物

质的检测，适用范围不如紫外检测器。影响因素较多。◆适用范围：具有天然荧光的物质或通过荧光衍生化变成荧光衍生物后测定，主要用于氨基酸、多环芳烃、维生素、甾体化合物及酶等的检测。◆优点：灵敏度很高，尤其适用于痕量组

分分析。◆缺点：干扰比较多，对温度和流速的变化比较敏感。◆适用范围：应用范围广，凡具氧化还原活性的或经衍生化后具氧化还原活性的物质。◆优点：灵敏度高，选择性好，能同时给出组分的结构信息。◆缺点：响应信号受离子化效率限制，仪器较为昂贵，流动相必须是挥发性的，不能用非挥发性的缓

冲盐及表面活性剂。◆适用范围：组分的结构鉴别，微量及痕量组分的分析，药物代谢分析等。◆优点：通用型检测器，只要组分的折光率与流动相的折光率有足够的差别就能检测。◆缺点：灵敏度低、受环境温度、流量及流动相组成等波动的影响大，一般不能用于梯度洗脱。◆适用范围：RID为通用型检测器，适用于无紫外

吸收化合物的分析，如糖类分析。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USPandEPUSP(32)EP(6.0)➢Fixed,variableandmulti-wavelengthdetectorsar

ewidelyavailable.➢UV、RID、FLD、ECD......➢Newdetectorscontinuetobedevelopedinattemptstoovercomethedeficienciesofthosebe

ingused.➢UV/Visspectrophotometers,includingdiodearraydetectors,arethemostcommonlyemployeddetectors.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在

国内外药典中的应用与比较流动相CHP(2010)➢反相系统首选甲醇-水系统（采用紫外末端波长检测，首选乙腈-水系统）➢缓冲盐：少用，尽可能低➢反相色谱系统，C-18柱，有机相比例应不低于5%。USP(32)➢High-purityreagentsand“HPLCg

rade”organicsolvents➢water:lowcondutivityandlowUVabsorptionEP(6.0)➢Fornomal-phasechromatography,lesspolarsolventsareemployed.Wateristobestrictlyco

ntrolled!➢0.45μm➢degassedbysparingwithhelium,sonicationorusingon-linemembrane/vacuum➢AdjustmentofthepH,iseffectedusin

gonlytheaqueouscomponentofthemobilephaseandnotthemixture.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较系统适用性SystemSuitabilityPP

T文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较定义➢CHP(2010):色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子四个参数，其中，分离度和重复性尤为重要。➢ICHde

finition:Systemsuitabilitytestingisanintegralpartofmanyanalyticalprocedures.Thetestsarebasedontheconceptthattheequipment,electronics,analyti

caloperationsandsamplestobeanalyzedconstituteanintegralsystemthatcanbeevaluatedassuch.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较Definition➢EP(6.0):Thesyste

msuitabilitytestsrepresentanintegralpartofthemethodandareusedtoensureadequateperformanceofthechromatographicsystem.Thevariouscomponentsoft

heequipmentemployedmustbequalifiedandbecapableofachievingtheprecisionrequiredtoconductthetestorassay.➢USP(32):Systemsuitability

testsareanintegralpartofgasandliquidchromatographicmethods.Theyareusedtoverifythattheresolutionandreproducibilityofthechromatographicsystemareadeq

uatefortheanalysistobedone.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较Definition➢USP(32):Nosampleanalysisisacceptableunlesstherequirementsofsystems

uitablityhavebeenmet.Sampleanalysesobtainedwhilethesystemfailsrequirementsareunacceptable.Systemsuitabilitymustbedemonstra

tedthroughouttherunbyinjectionofanappropriatecontrolpreparationatappropriateintervals.Whereverthereisasig

nificantchangeinequipmentorinacriticalreagent,suitabilitytestingshouldbeperformedbeforetheinjectionofsamples.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药

典中的应用与比较理论板数u评价色谱柱的重要指标。CHP(2010)*USP(32)*EP(6.0)JP(XV)n=16(tR/W)2n=5.54(tR/Wh/2)2N=16(t/W)2N=5.54(t/Wh/2)2N=5.54(tR/Wh)2Wh：半高峰宽N=5.54×(tR

/W0.5h)2W0.5h：半高峰宽◆影响因素：固定相、柱温、流动相和保留时间。•*有争议时，以峰宽（W）计算结果为准PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较分离度（R）◆衡量色谱系统效能

的关键指标！PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较分离度（R）CHP(2010)*➢R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)➢R=2(tR2-tR1)/1.70(W1,h/2+W2,h/2)➢除另有规定外，应

大于1.5USP(32)*#EP(6.0)#JP(XV)*有争议时，以峰宽（W）计算结果为准；#describedinindividualmonographPPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USP(32)uChromatographicsystem

—Theliquidchromatographisequippedwitha275-nmdetectoranda4.6-mm×15-cmcolumnthatcontainspackingL1……theresolution,R,betweentheim

purityCandfamotidinepeaksisnotlessthan1.3;theresolution,R,betweenthefamotidineandimpurityDpeaksisnotlessthan1.3;Famotidin

eTabletsAssaryPPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较EP(6.0)◆左甲状腺素钠含量测定：◆左羟丙哌嗪对映体纯度：PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较重复性评价连续进

样中，色谱系统响应值的重复性能。CHP(2010):u外标法：对照品溶液，连续进样5次，峰面积RSD不得过2.0%。u内标法：配制相当于80%、100%、120%的对照品溶液，加入内标溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子的RSD不得过2.0%。PPT文档演模板2023/3/15HP

LC法在国内外药典中的应用与比较重复性USP(32):uUnlessotherwisespecifiedintheindividualmonograph,datafromfivereplicateinjectionsoftheanalyteareu

sedtocalculatetherelativestandarddeviation,SR,iftherequirmentis2.0%orless;datafromsixreplicateinjectionsareusediftherela

tivestandarddeviationrequirmentismorethan2.0%.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较重复性EP(6.0):uTherepeatabilityofresponseisexpresse

dasanestimatedpercentagerelativestandarddeviation(Sr(%))ofaconsecutiveseriesofmeasurementsforNOTfewerthan

3injectionsorapplicationsofareferencesolution.meanofindividualvaluesindividualvaluesexpressedaspeakarea,peakheight,orratioofareasbytheinteral

standardisationmethodnumberofindividualvaluesPPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较重复性EP(6.0):◆Unlessotherwiseprescribed,themaximumpermittedRSDdoesnote

xceedtheappropriatevaluegivenintable.Numberofindividualinjections3456B(percent)Maximumpermittedrelativestandarddeviation2.00.410.590.730.85

2.50.520.740.921.063.00.620.891.101.27PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较重复性uNOTE:Thisrequirementdoesnotapplytotestsforrelatedsubstances.upperlimit

giveninthedefinitionoftheindividualmonographminus100%contant(0.349)numberofreplicateinjectionsoftherefere

ncesolution(3≤n≤6)90%probabilitylevel，n-1degreesoffreedomEP(6.0):◆Inanassayofanactivesubstancewheretheva

lueis100percentforapuresubstance,themaximumpermitted(Sr(%)max)fordefinedlimitsiscalculatedusingthefollowingequation:PPT文档演模板2023/3

/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较重复性JP(XV):公式与EP相同。u重复次数及限度在各论中要求。u例：RitodrineHydrochlorideRelatedsubsancesSystemsuitability—Testforrequired

detectability:............Systemperformance:............Systemrepeatability:Whenthetestisrepeated6timeswith......，therelativestandarddeviationofth

epeakareasofdeferoxamineisnotmorethan3.0%.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较拖尾因子（对称因子）u用于评价色谱峰的对称性PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较拖尾因子T（orSymme

tryfactor）CHP(2010)➢T=W0.05h/2d1➢应符合个论项下的规定➢除另有规定外，峰高法定量时T应在0.95~1.05之间USP(32)T=W0.05/2fEP(6.0)➢As=W0.05h/2d➢AnAsvalueof1.0signifiessymmetry.When

As＞1.0,thepeakistailing.WhenAs＜1.0,thepeakisfronting.➢Inarelatedsubstancestestorassay,forapeakinthechromatogramobtainedwithareferences

olutionusedforquantification,thesymmetryfactoris0.8to1.5,unlessotherwiseprescribed.JP(XV)S=W0.05h/2fPPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USP

uItisalsoacommonpracticetomeasuretheAsymmetryfactorastheratioofthedistancebetweentheverticallineconnectingthepeakapexwithth

einterpolatedbaselineandthepeakfront,andthedistancebetweenthatlineandthepeakbackmeasureat10%ofthepeakheight,itwouldbe(W0.10-f0.10

)/f0.10uHowever,forthepurposeofUSP,onlytheformulapresentedintheGlossaryofSymbolsisvalid.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较EP中系统适用性：p/vandS/NuTh

epeak-to-valleyratio(p/v)maybeemployedasasystemsuitabilitycriterioninatestforrelatedsubstanceswhenbaselineseparationbetween2peaksisnotachieved.up/v=H

p/Hv◆Forexample:EconazolerelatedsubstancesPPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较EPuTheshort-termnoiseinfluencestheprecisionofquantification.Thesig

nal-to-noiseratioiscalculatedusingthefollowingequation:uS/N=2H/h◆Forexample:ketotifenhydrogenfumaraterela

tedsubstancesPPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较色谱条件的调整AdjustmentofChromatographicConditionsPPT文档演模板2023/3/15H

PLC法在国内外药典中的应用与比较CHP(2010)u明确规定：u不可变的有：固定相的种类、流动相的组分、检测器类型u可变的有：色谱柱内径、长度、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与

比较CHP(2010)u与CHP(2005)不同：《中国药典》2010年版规定了流动相调整的限度。u调整流动相组分比例时，以组分比例较低者（≤50％）相对于自身改变量不超过±30％且相对于总量的改变量不超

过±10％为限，如30％相对改变量的数值超过总量的10％时，则改变量以总量的±10％为限。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较CHP(2010)u例：奥美拉唑肠溶片，释放度检查，色谱条件：◆问题：峰型

差！◆流动相可调范围：82.5:17.5~67.5:32.5◆解决：70：30PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USP(32)pHofmobilephaseconcentrationofsaltsinbufferratioofcomponentsinmobil

ephaseWavelengthofUVdetectorinjectionvolume➢pHoftheaqueousbuffer➢within±0.2unitsofthevalueorrangespecifiedwithin±10%providedthe

permittedpHvariationismetapplytominorcomponentscanbeadjustedby±30％relativecannotexceed±10%absolute,seee

xample:binaryorternarymixturesnotpermittedcanbereducedasfarasisconsistentwithacceptedprecisionanddetectio

nlimitscolumnlengthcolumninnerdiameterparticlesizeflowratecolumntemperature±70%±25%canbereducedbyasmuchas5

0%±50%±10°◆Ifadjustmentsofoperatingconditionstomeetsystemsuitabilityrequirmentsarenecessary,eachofthefollowingisthemaxiumvaria

tionthatcanbeconsidered,unlessotherwisedirectedinthemonograph.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USP(32)uBina

ryMixtures—uSPECIFIEDRATIOOF50:50—Thirtypercentof50is15%absolute,butthisexceedsthemaximumpermittedchangeof±10%absolutei

neithercomponent.Therefore,themobilephaseratiomaybeadjustedonlywithintherangeof40:60to60:40.uSPECIFIEDRATIOOF2:98—Thirtypercentof2is0.6%absolute

.Thereforethemaximumallowedadjustmentiswithintherangeof1.4:98.6to2.6:97.4.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USP(32

)uTernaryMixtures—uSPECIFIEDRATIOOF60:35:5—Forthesecondcomponent,30%of35is10.5%absolute,whichexceedsthemaximumpermi

ttedchangeof±10%absoluteinanycomponent.Thereforethesecondcomponentmaybeadjustedonlywithintherangeof25%to45%absolute.Forthethi

rdcomponent,30%of5is1.5%absolute.Inallcases,asufficientquantityofthefirstcomponentisusedtogiveatotalof100%.Therefore,m

ixturerangesof50:45:5to70:25:5or58.5:35:6.5to61.5:35:3.5wouldmeettherequirement.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较EP(6.0)◆Theextenttowhichthe

variousparametersofachromatographictestmaybeadjustedtosatisfythesystemsuitabilitycriteriawithoutfundamentallymodifyingthemethodsare

listedbelow.◆Isocraticelution:pHoftheaqueouscomponentofthemobilephaseconcentrationofsaltsinbuffercompositionofthemobilephaseWavelengthco

lumntemperature±0.2pH±1.0pH(non-ionisable)within±10%Minorcomponent30%relativeor±2%absolutewhicheverislarger.Nocomponentcanbealter

edbymorethan10%absolute（seeexample）noadjustmentpermitted±10℃columnlengthinteraldiameterparticlesizeflowrateinjectionvolume±70%±25%maximumreductiono

f50%noincreasepermitted±50%alargeradjustmentisacceptable（seeexample）maybedecreasednoincreasepermittedPPT文档演模板2023/3/15H

PLC法在国内外药典中的应用与比较EP(6.0)uCompositionofthemobilephase:theamountoftheminorsolventcomponentmaybeadjustedby±30%relativeor±2%abso

lute,whicheveristhelarger;foraminorcomponentat10%ofthemobilephase,a30%relativeadjustmentallowsarangeof7-13%wherea2%absoluteadjustm

entallowsarangeof8-12%,therelativevaluebeingthereforethelarger;uForaminorcomponentat5%ofthemobilephase,

a30%relativeadjustmentallowsarangeof3.5-6.5%whereasa2%absoluteadjustmentallowsarangeof3-7%,theabsolutevaluebeinginthiscasethelar

ger.uNoothercomponentisalteredbymorethan10%absolute.PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较EP(6.0)uWhencolumndimensionsarechanged,theflowratemayb

eajustedasnecessaryusingequation:F1：规定的流速F2：调整后的流速l1：规定的柱长l2：实际所用的柱长d1：规定柱子的内径d2：实际所用柱子的内径PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较EP(6.0)pHoftheaque

ouscomponentofthemobilephaseconcentrationofsaltsinbuffercompositionofthemobilephaseWavelengthofUVdetectorcolumntemperaturenoadjustmentperm

ittednoadjustmentpermitted✓thesystemsuitabilityrequirementsarefulfilleld✓theprincipalpeakelutewithin±15%oftheindicatedretentiontim

e✓elutionpowerisnotweakerthanbeforenoadjustmentpermitted±5℃columnlengthinteraldiameterparticlesizeflowrateinject

ionvolume±70%±25%noadjustmentpermittedsameasisocraticelutionmaybedecreasednoincreasepermitted◆Gradientelution：morecriticalthanwithisocraticelutio

nPPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较HPLC的应用及方法开发PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较HPLC应用类型定义I原料药或药物制剂活性成分中主要成分的分析程序-如含量测定II原料药中杂质检查或药物制剂

中降解产物的分析程序，这些分析程序包括定量试验或限度试验III用于性能参数测试的分析程序-如溶出度、释放度IV鉴别试验◆HPLC可以用来干什么？PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较方法开发的指导原则uICHuUSPu《中国药典》PPT文档演模板202

3/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较ICHuICH(人用药品注册技术要求国际协调会)三方协调指导原则Q2A：分析方法论证的文本ICH三方协调指导原则Q2B：方法学ICH三方协调指导原则PPT文档演模板2023/3/

15HPLC法在国内外药典中的应用与比较ICH分析方法的类型项目鉴别杂质检查含量分析，溶出度，含量/效价定量限度检测准确度－+－+精密度重复性－+－+中间精密度－+△－+△专属性++++检测限度－－+－定量限度

－+－－线性－+－+范围－+－+①通常而非绝对②△如已平评价重复性，可不再评价PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较ICHu值得一提的：表中没有列出耐用性，但在分析方法研究过程的适当阶段，应予以

考虑！u如果测量结果对分析条件的变化时敏感的，那么该分析条件就应当适当控制或在方法中注明。通过耐用性评估，建立一系列的系统适用性参数，以确保在任何时候使用该分析方法都是有效的。u在HPLC中典型变化的例子：流动相pH值变化流动相组分变化不同柱子温度流速PPT文档演模板2023

/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USP◆<1225>ValidationofcompendialproceduresTypicalAnalyticalCharacteristicsUsedinMethodVal

idationAccuracyPrecisionSpecificityDetectionLimitQuantitationLimitLinearityRangeRobustnessPPT文档演模板2023

/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较USP检测技术IIIIIIIV定量试验限度试验HPLCP，S，LP，S，LOQS，LODPSP＝精密度；S＝专属性；L＝线性：LOD＝检测限；LOQ＝定量限HPLC方法中的要求：PPT文档演模板2023/3/15

HPLC法在国内外药典中的应用与比较CHP(2010)u《中国药典》2010年版附录ⅩⅨA药品质量标准分析方法验证指导原则u基本与ICH相同，增加了耐用性，且比ICH详细。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用

与比较色谱柱的选择键合相应用硅胶小分子有机物，天然产物，脂溶性维生素，维生素EC18药物，天然产物，农用化学品，维生素，碱性化合物，一般的反相应用大极性化合物，药物，维生素，抗生素亲水性蛋白质，寡聚核苷酸碱性化合物，在高pH条件下增加保留和载样量C12药物，天然产物

，农用化学品，维生素，氨基酸，碱性化合物，一般的反相应用C8药物，雌性激素，碱性化合物，一般反相应用C5极性化合物及疏水性蛋白质C4疏水性蛋白质苯基极性和芳香化合物，抗生素，油脂，酚类，甜味剂氰基药物，脂类，类固醇，邻苯二甲酸

盐，含有羧基、羰基、伯、仲、叔胺基的化合物氨基糖类，糖醇，阴离子化合物，类固醇，维生素，核苷酸，寡聚核苷酸SCX胺类和聚胺类化合物，核苷酸，多肽PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较色谱柱的选择u特殊的：u含光学异构体（对映体

）——特殊的手性柱u含其他异构体（立体、位置）——一般正相柱最佳，尤其用原硅胶柱u无机盐混合物——离子色谱法......PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较耐用性u耐用性试验经常会提到用不

同类型的色谱柱进行试验。u所谓的不同类型*：uA型色谱柱：早期色谱柱，无定形或球形硅胶，硅胶纯度较低，重金属含量高，键合密度较低，碳载量较低，未采用封尾技术或不完全封尾技术，硅羟基活性高，残留硅羟基导致的“第二效应”较强，能与碱性化合物、酸性化合物发

生氢键和离子交换作用，造成峰拖尾，但对于某些极性化合物，硅羟基是组分分离的主要因素。*引自中检所SOPPPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较uB型色谱柱：球形高纯硅胶，重

金属含量较低，键合密度较高，碳载量较高，采用非极性基团封尾技术，使硅羟基活性降低，能改善碱性化合物、酸性化合物的分离。uE型色谱柱：2种亚型，Ec型采用极性基团封尾（如二醇基），Eb型则是在十八烷基中嵌入极性基团（如甲酰胺基）使填料亲水性增加，能用100%水

溶液作为流动相，具有独特选择性。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较u不同的色谱柱公司都有不同的柱子供选择。u可以根据需要购买。PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较u高效液相色谱法的知识还有很多很多......u特别是高

效液相色谱法的建立更是学问多多......u在以后的工作中，相互学习，相互探讨......PPT文档演模板2023/3/15HPLC法在国内外药典中的应用与比较演讲完毕，谢谢听讲!再见，seeyouagain