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羊水检验医学知识专题讲座羊水检验概念•羊水（amnioticfluid）妊娠时羊膜腔中液体•来源妊娠早期：母体血浆经胎膜透析胎儿脐带、胎盘表面羊膜及未角化胎儿皮肤产生透析液妊娠中晚期：胎尿（主要来源）•动态平衡胎儿与母体之间羊水检验医学知识专题讲座2⚫功能：保护母体和胎儿。⚫水----⚫组

成：⚫溶质--⚫有机物----无机盐----细胞---98%～99%1%～2%50%50%极少量羊水检验医学知识专题讲座3⚫适应证高危妊娠有流产、早产、死胎史者疑胎儿遗传性疾病者亲代有代谢性缺陷病者曾分娩过染色体异常婴儿

者高龄孕妇确定性连锁遗传病携带者胎儿性别者疑母儿血型不合者妊娠早期受大剂量电离辐射者曾患严重病毒感染性疾病者检查宫内胎儿有无感染者羊水检验医学知识专题讲座4⚫一、标本采集⚫羊膜穿刺多由妇产科医师进行。第一节标本采集与处理羊水检验医学知识专题讲座

5标本项目标本要求妊娠16～20周诊断胎儿遗传性疾病或性基因羊水20～30ml妊娠晚期判断胎儿成熟度及疑有母婴血型不合羊水10～20ml标本送检立即，或4℃冰箱保存，小于24h标本处理1000～2000r/min

，离心10min后，上清液作生化检查中期妊娠羊水细胞作染色体核型分析或先天性代谢缺陷病检查晚期妊娠羊水沉淀物作脂肪细胞及其他有形成份检查穿刺时间取决于羊水检查的目的(表)：羊水检验医学知识专题讲座6项目病理颜色透明度正常：妊娠早期：无色透明

或淡黄色妊娠晚期：略混浊黄绿色或深绿色：胎儿窘迫，羊水含胎粪金黄色：母儿血型不合，羊水中大量胆红素脓性混浊臭味：羊膜腔感染黄色粘稠：胎盘功能减退、过期妊娠比密：足月妊娠1.007～1.025酸碱度：7.20～7.60妊娠后期渗透压：230～270m

mol/kg粘度：1.75～1.85表羊水理学检查羊水检验医学知识专题讲座716周：约250ml足月：800ml～1200ml羊水过多（polyhydramnios）＞2000ml：①胎儿畸形：胎儿神经管缺

陷：无脑儿、脑膨出、脊柱裂。消化道畸形：食管或小肠闭锁②胎盘脐带病变：胎盘绒毛血管瘤、脐带帆状附着③孕妇及胎儿其他疾病：糖尿病、ABO或Rh血型不合④多胎妊娠⑤特发性羊水过多：原因不明，孕妇、胎儿及胎盘均无异常2．羊水过少（oligohydramnios）妊娠晚期羊水量＜300

ml①胎儿畸型：胎儿先天肾缺如、双肾发育不全、尿道闭锁②过期妊娠：胎盘功能减退③胎儿宫内发育迟缓羊水检验医学知识专题讲座8羊水化学检查水分98%～99%有机物和无机盐：1%～2%有形成分：少量白细胞、胎儿上皮细胞羊水检验医学知识专题讲座9表化学

检查项目检查项目妊娠期临床意义电解质（mmol/L）足月妊娠钠34～41钾6.5～6.7氯108～110钙2.25～2.5镁0.41～8.82气体PO2（mmHg）早期PCO233～55（4.4～7.3kPa

）后期PCO242～55（5.6～7.3kPa）蛋白质36～40周：达最高超过预产期：下降，故可用作诊断过期妊娠的指标。为母体血清蛋白的1/20。60%～70%为清蛋白。增高：前清蛋白来自胎儿并随胎龄的

增长而增高。重症母婴Rh血型不合、死胎及无脑儿时羊水检验医学知识专题讲座10检查项目妊娠期临床意义脂肪脂肪：500mg/L，50%脂肪酸，磷脂30～45mg/L妊娠后半期：胆固醇0.52～2.48mg/L甘油三脂68μmol/L胆红素28周前：多为

未结合胆红素随着胎儿肝脏发育成熟未结合胆红素减少而结合胆红素增加葡萄糖2.02～2.76mmol/L37周后：轻度降低来自母体，可以反映胎儿肾成熟程度代谢产物肌酐、尿酸、尿素评价胎儿肾成熟度的指标。羊水检验医学知识专题讲座11检查项目妊娠期临床意义甲胎蛋白16～20周：40mg/L3

2周：为25mg/L增高：主要见于开放型神经管畸形酶：γ-谷胺酰转移酶、肌酸激酶、胆碱脂酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等。酶主要来自破坏的羊水细胞和少量来自胎儿，常用于胎儿遗传性代谢缺陷病产前诊断1.激素：2.蛋白激素、前列腺素、甲状腺激素

、甾体激素，等3.来自胎盘及胎儿羊水检验医学知识专题讲座12胎儿成熟度检验目的：决定选择高危妊娠有利分娩时机；降低新生儿死亡率方法：监测羊水成份变化，评价相关器官功能状况羊水检验医学知识专题讲座13胎儿肺成熟度检查羊水泡沫试验（foamstabilitytest或shaketest）检

测原理羊水中肺泡：表面活性物质和磷脂经振荡后所形成的泡沫，在室温下可保持数小时。检测特点最常用床边试验，是间接估量羊水磷脂的方法。操作简单、报告迅速临床应用阳性：两试管液面均有完整泡沫环，表示L/S≥2、胎儿肺已成熟。两管均无泡沫环，示胎儿肺未成熟第1管液面有完整泡沫环，表示L/S＜

2羊水检验医学知识专题讲座14薄层色谱法卵磷脂（lecithin，L）与鞘磷脂（sphingomyelin，S）比值测定（L/S）检测原理肺泡表面活性物质能维持肺泡的稳定性。34周前：卵磷脂与鞘磷脂含量接近。35周后：卵磷脂合成明显加快，37周时，达

高峰。求出L/S的比值。检测特点临床最早评估胎儿肺成熟度状态的实用化学分析方法，准确性较高，至今仍为参考方法；但费力、耗时临床应用L/S≥2，提示胎儿肺已成熟。L/S1.5～1.9，为临界值，IRDS发生率为50%。注意：①当母体无糖尿病

：L/S＞2时，对预测无IRDS的可能性为95%，表明L/S诊断特异性高；L/S＜2时，对预测发生IRDS的可能性为25%，表明L/S诊断灵敏度很低②当母体有糖尿病：即使L/S＞2时，仍可发生IRDS。羊水检验医学知识专

题讲座15磷脂酰甘油测定（phosphatidylglycerol，PG）检测原理磷脂酰甘油是肺泡表面活性物质磷脂成份之一，约占羊水中总磷脂的10%。妊娠35周后羊水中出现磷脂酰甘油，含量随妊娠时间而增加。检测方法：酶法、快速胶乳凝集试验测定检测特点直

接检测羊水中卵磷脂和磷脂酰甘油；灵敏度和特异性高。临床应用PG阳性，提示胎儿肺已成熟，新生儿一般不会发生IRDSPG阴性，即使L/S比值≥2，仍可能发生IRDS。羊水检验医学知识专题讲座16羊水吸光度测定检测原理检测特点羊水磷脂类物质含量与其浊

度之间呈正比，磷脂类物质越多，则吸光度越大。间接估量羊水磷脂，其他羊水成分浊度的影响。羊水检验医学知识专题讲座17荧光偏振微粘度测量法（microviscositytestbyfluorescencedepolarizationmethod）检测原理检测特点根据较高的表面活

性物质可产生较低的偏振值的原理，测定羊水肺泡表面活性物质。价廉、准确。灵敏度87%，特异性92%。羊水检验医学知识专题讲座18新生儿特发性呼吸窘迫综合征（idiopathicrespiratorydistresssyndrome，IRDS）肺泡表面活性物质卵磷脂缺乏，是新生儿严重疾病之一。主

要见于37周前早产儿、剖宫产儿、糖尿病产妇或妊娠高血压综合征的初生儿羊水检验医学知识专题讲座19胎儿肾发育成熟检测项目检验项目临床意义羊水葡萄糖测定（amnioticfluidglucose，AFG）羊水葡萄糖主要来源母体血浆、部分来自胎尿。＜0

.56mmol/L，提示胎儿肾发育成熟＞0.80mmol/L，提示胎儿肾不成熟妊娠24周，AFG达峰值约2.29mmol/L。当胎儿肾逐渐发育成熟，肾小管重吸收葡萄糖作用增强，胎儿尿排入羊水的葡萄糖减少。随胎龄增加，胎盘通透性降低，母体血浆进入羊水的葡萄糖减少，AFG逐步降低。羊水检验医

学知识专题讲座20胎儿肝成熟度检测项目检测原理临床意义用分光光度计测定羊水中胆红素吸光度：羊水胆红素浓度与胎儿肝脏酶系统发育成熟程度有关。A450：＜0.02：胎肝成熟0.02～0.04：肝成熟可疑＞0.04：胎肝未成熟。随胎儿肝脏酶系统发育成熟，羊水未结合胆红素

逐渐减少，结合胆红素逐渐增多。羊水检验医学知识专题讲座21胎儿皮肤成熟度检查检测原理临床应用羊水脂肪细胞百分率随胎龄增加而增高。羊水沉淀物用硫酸尼罗蓝水溶液染色，镜检脂肪细胞的百分率（脂肪细胞染成桔黄色、无核，其他细胞呈蓝色）脂肪细胞百分

率：＞20%，胎儿皮肤成熟10%～20%，胎儿皮肤成熟可疑＜10%，胎儿皮肤未成熟脂肪细胞来自胎儿皮脂腺及汗腺脱落细胞。随胎龄增加，胎儿皮脂腺逐渐发育成熟，脂肪细胞出现率增高。1.36mmol/L硫酸尼罗蓝，羊水检验医学知识专题讲座22胎儿唾液腺成熟度检查检验原理临床应用羊水唾液腺型淀粉酶活性

在妊娠36周后显著增高。用Somogyi法检测羊水淀粉酶＞120U/L为成熟。羊水胰腺型同功酶活性在妊娠过程中无明显变化。妊娠28周左右，羊水唾液腺型淀粉酶活性快速增高。妊娠36周后，其活性显著上升。羊水检验医学知识专题讲座23羊水显微镜检验一、羊水脂肪细胞计数【检测原理】脂肪细胞计数是反映

胎儿皮肤成熟程度的指标。将羊水涂片用尼罗蓝水溶液染色后，显微镜下观察，计数200～500个细胞，计算脂肪细胞阳性率。羊水检验医学知识专题讲座24【参考范围】妊娠34周前羊水脂肪细胞≤1%；34～38周为1%～10%；38～4

0周为10%～15%；40周以后大于50%。【临床意义】大于20%为胎儿皮肤成熟的指标。10%～20%为临界值。小于10%为皮肤不成熟。大于50%为皮肤过熟。羊水检验医学知识专题讲座25二、羊水快速贴壁细胞计数【检测原理】1.正常羊水细胞需要4～5d才能贴壁生长。2.胎儿畸形，

如神经管缺陷及脐疝畸形时，羊水细胞仅需20h即可贴壁生长，此种细胞称为快速贴壁细胞(RAC)，具有贴壁生长快、活细胞贴壁率高的特点。通过计算活细胞贴壁率，来判断有无畸形。羊水检验医学知识专题讲座26【参考范围

】＜4%。【临床意义】RAC主要用于胎儿畸形的诊断。脐疝畸形的RAC为9%～12%，无脑儿的RAC为100%。羊水检验医学知识专题讲座27羊水病原生物学检验一、病毒1.风疹病毒检查【检测原理】①病毒分

离培养法。②血凝抑制试验。③风疹病毒特异性IgM测定。④PCR：灵敏度高，特异性强，具有早期快速诊断的价值。羊水检验医学知识专题讲座28【临床意义】风疹病毒是引起胎儿畸形的病毒之一①妊娠1～2周感染风疹病毒者

，胎儿严重畸形发生率为30%～80%；②妊娠12～18周感染风疹病毒者，10%～20%胎儿可有智力障碍和听力缺陷；③妊娠18周以后感染风疹病毒的危害性很低。羊水检验医学知识专题讲座292．巨细胞病毒检查巨细胞病毒是疱疹病毒的一种。WHO已将其列为引起新生儿出生缺陷的主要病原体。3.单纯疱

疹病毒检查单纯疱疹病毒是疱疹病毒的一种。与胎儿和新生儿有关的主要是Ⅱ型。羊水检验医学知识专题讲座30二、弓形虫【检测原理】①组织学：可直接寻找弓形虫的滋养体、包囊或卵囊等。②血清学：有Sabin-Feldman染色试验、补体结合试验、间接

荧光抗体试验或间接血凝试验等。③PCR：以B1基因、200-300重复序列（AF146527）或16SrDNA为目的基因。羊水检验医学知识专题讲座31【临床意义】可引起弓形虫病，为人畜共患疾病。孕妇感染弓形虫后，除了通过胎

盘感染胎儿外，还可经过羊水进入消化道而使胎儿感染。孕妇感染弓形虫后，可造成流产、早产、胎儿小头畸形、脑积水、视力障碍、智力发育缺陷等畸形。羊水检验医学知识专题讲座32羊水检验的质量控制与临床应用一、质量控制①AFP：母体AFP检测连续2次阳性时，再考虑是否行羊水AFP检查。②羊水胆红素

检测：要求避光。③羊水泡沫试验：新鲜标本或4℃冷藏。操作时需用力振荡。羊水检验医学知识专题讲座33二、临床应用⚫产前诊断羊水检验医学知识专题讲座34先天性遗传性疾病产前诊断产前诊断（prenataldia

gnosis）＝出生前诊断（antenataldiagnosis）＝宫内诊断(intrauterinediagnosis)检查目的判断胎儿有无先天性遗传性疾病，以确定是否进行选择性流产检查方法影像学、生物化学、细胞遗传学、分子生物学等技术羊水检验医学知识专题讲座35产

前诊断疾病种类：染色体病染色体异常染色体疾病常染色体数目异常常染色体多1条染色体称为三体先天愚型（21－三体综合征）常染色体结构异常染色体缺失、重复、倒位及易位性染色体数目异常性染色体数异常先天性卵巢发育不全症（45，XO）羊水检验医学知识专题讲座36产前诊断疾病种类：染色体病染

色体异常染色体疾病单基因遗传病仅有1对基因发生突变或异常，多为酶缺陷引起代谢紊乱、代谢中间产物累积用生化方法可诊断300多种先天性代谢缺陷病。用羊水细胞诊断80多种先天性代谢缺陷病。多基因遗传病2对以上基因发生突变。占产前诊断的40%～50%先天

畸形如唇腭裂和畸形足、脊柱裂、无脑儿、神经管畸形、幽门狭窄；先天性心脏病先天性髋关节脱位，等羊水检验医学知识专题讲座37染色体核型分析是产前诊断染色体病主要方法染色体细胞制备培养时间：胎儿羊水细胞9～12d绒毛细胞7～14d胎儿血细胞24～48原位杂交技术

或引物原位DNA合成技术，1h可获染色体核型分析准确结果羊水检验医学知识专题讲座38先天性遗传性疾病产前诊断性连锁遗传病(sex-linkedinheritancedisease)：多为X连锁隐性遗传病，临床常见有血友病甲、血友病乙、G-6-PD

缺乏症等。如：父亲为X连锁隐性基因携带者，母亲为正常，则男性胎儿正常，女性胎儿全为X连锁隐性基因携带者如：母亲为X连锁隐性基因携带者，父亲为正常，则男性正常胎儿和患儿各占50%，女性正常胎儿和基因携带者各50%羊水检验医学知识

专题讲座39X染色质检查（examinationofXchromatin，Barrtest）羊水细胞染色硫瑾或甲苯胺蓝可数细胞胞核大、核膜完整，染色质均匀，结构清晰X染色质（Barr小体）呈深蓝色染色质块，位于可数细胞核膜内缘处。计数100个可数细胞核

中与核膜相贴的X染色质，计算百分率。女胎≥6%，男胎≤5%非可数细胞细胞核固缩，染色较深，结构不清羊水检验医学知识专题讲座40性别基因诊断目的：羊水细胞性别检查复杂，干扰因素多。基因诊断可提高正确性、可靠性。性别基因诊断最常用方法Y特异DNA探针Y染色体特异

的SRY基因区域（sexdeterminatingregionofYchromosome）聚合酶链反应目前认为，SRY是睾丸决定因子的最佳候选基因羊水检验医学知识专题讲座42神经管缺陷产前诊断1．甲胎蛋白(AFP)测定：神经管缺陷产前诊断最常

用方法来源AFP主要在胎儿肝脏和卵黄囊合成，部份来自胎儿胃肠道、羊膜及绒毛膜细胞，随胎儿尿液排入羊水正常妊娠16～20周羊水中达40mg/L20～22周逐步下降32周后降至25mg/L至妊娠足月无脑儿、脊柱裂等开放性神经管缺陷胎儿胎儿血AFP是羊水AFP的150～200倍。患儿：可使羊水中AFP

含量高于正常妊娠羊水中10倍以上。母血筛查诊断开放性神经管缺陷，准确率90%以上其他AFP增高疾病胎儿脑积水、先天肾脏病及糖尿病，先兆子痫等所致胎盘功能不足、流产、死胎等羊水检验医学知识专题讲座432．羊水胆碱酯酶测定羊水总胆碱酯酶测定(to

talcholinesterase，TChE)正常妊娠妊娠12周，羊水ChE活性明显增高开放性神经管缺陷胎儿胎儿脑脊液和血液：直接渗入羊水，羊水ChE活性明显增高。羊水真性胆碱酯酶测定(actualcholinest

erase，AChE)检测方法聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。筛诊阳性率可达到99.5%活性增高有助于确诊胎儿开放性神经管畸形。其他：严重先天畸形、流产、胎儿脐疝等羊水检验医学知识专题讲座44粘多糖沉积病产前诊断发病机制细胞溶酶体酸性水解酶先天性缺陷临床表现肝脾肿大、智力障碍、骨骼畸形等最佳

方法测定培养羊水细胞内酸性水解酶活性常用方法甲苯胺蓝定性试验正常妊娠早期：弱阳性正常妊娠中、后期：阴性。阳性：提示胎儿患有粘多糖沉积病糖醛酸半定量试验肌酐中糖醛酸含量反映酸性粘多糖的多少正常妊娠16～20周：含量为3.3～7.0m

g/mgCr。增高：提示胎儿患粘多糖沉积病羊水检验医学知识专题讲座45胰腺纤维囊性变产前诊断γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）测定产前早期诊断胰腺纤维囊性变的最佳指标正常妊娠14～15周：为母体血清10～100倍。随着胎龄增长，γ-

GT活性逐渐下降。30～40周：为妊娠15周的1/40。胰腺纤维囊性变胎儿妊娠15周，羊水γ-GT活性明显降低其他疾病21三体或18三体综合征畸胎碱性磷酸酶(ALP)测定正常妊娠19周左右，ALP活性最高。29周后ALP活性稳定在产

前水平。胎儿胰腺囊性变ALP活性明显降低羊水检验医学知识专题讲座46羊水细胞内酶分析先天性代谢缺陷病：系因基因突变导致某种酶的缺失多数先天性代谢缺陷病：尚无有效的治疗方法（除苯丙酮尿症、肝豆状核变性等可通过控制饮食和

药物治疗外）羊水检验医学知识专题讲座47分子生物学技术在产前诊断中应用DNA探针技术：单股DNA小片段以放射性同位素、酶、荧光素或化学发光物标记后，同被检DNA中的同源互补系列杂交，从而检出所要查明的DNA（基因）。羊水检验医学知识专题讲座48常用检测基因方法1．核酸分子杂交法点杂交一般

用于多拷贝基因的探测或筛选。如Y基因探针胎儿性别诊断Southern印迹杂交最常用核酸分子杂交法：（1）限制酶图谱法：用于基因缺失或突变涉及限制位点改变的基因诊断。如β珠蛋白生成障碍性贫血，纤维囊性变等可用限制酶图谱法

。（2）寡核苷酸直接探测法：用于探测点突变或框架位移。（3）限制内切酶片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP）分析法：用于基因突变位点不清，分子病理学改变复杂的遗传病的基因探测。2．聚合酶链反应PCR具有快速、简

便、灵敏度和特异性高的特点羊水检验医学知识专题讲座49（二）评估胎儿成熟度羊水检验医学知识专题讲座501.肺成熟度2.肾成熟度3.肝成熟度4.唾液腺成熟度5.皮脂腺成熟度羊水检验医学知识专题讲座51（三）诊断TORCH感染⚫TORCH

是一组病原生物的英文名称缩写，即弓形虫（toxoplasmagondii）、其他病原微生物（others）、风疹病毒（rubellavirus）、巨细胞病毒（cytomegalovirus）、单纯疱疹病毒

（herpessimplexvirus）第一个英文字母的组合。羊水检验医学知识专题讲座52【临床意义】这组病原生物常可通过胎盘传给胎儿，引起围产期感染，导致流产、死胎、早产、先天畸形和智力障碍等各种异常。因此，TORCH感染的检验已成为许多地区孕期检查的常规项

目。羊水检验医学知识专题讲座53羊水检验是一种较为安全、可靠的诊断方法，对产前诊断、评估胎儿成熟度、筛选先天性遗传病、和检查宫内感染等有重要价值。总结羊水检验医学知识专题讲座54谢谢大家！羊水检验医学知识专题讲座55