【文档说明】兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制培训课件.ppt，共(47)页，2.124 MB，由小橙橙上传

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兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制产品批准文号•农业部颁发批准文号•GMP证书(具备该疫苗生产线)•产品复核检验(具备生产该疫苗的能力)•标签、说明书样稿审查(符合规程规定)•省级文号？2兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制菌（毒）种•菌（毒）种是疫苗生产

必备的原材料，国家对菌（毒）的保管和使用有严格的规定和限制（生物安全问题）。•生产疫苗的菌（毒）种来源：中国兽医药品监察所或新兽药转让单位。•菌（毒）种保管和使用：基础种毒由中国兽医药品监察所或其委托的保管单位进行生产、鉴定和保管，生产用种子批由企业生产、鉴定和保管。3

兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制菌（毒）种分类菌（毒）种分强毒和弱毒•强毒：通常指从得病动物体内分离到的致病毒株，只能用于制造灭活疫苗和检验用•弱毒：通常是采用人工的方法用强毒致弱而成，一般于制造活疫苗4兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制菌（毒）种质量标

准•生物学特性明显、历史清楚：形态、培养特性、生化特性及血清免疫学特性等明显，易于鉴别；人工感染动物引起稳定一致的临床症状和病理变化特征；原始细菌或病毒株的来源地区、动物品种流行资料清楚；分离鉴定资料完整；传代、保藏和生物学特性

检查方法明确。•遗传学上相对纯一与稳定：菌毒种在传代增殖过程中某些遗传形状会发生改变和分离，如形态特征、毒力、反应原性、免疫原性等方面，因此要求制造生物制品的菌（毒）种的这种改变和分离越小越好，应经常进行挑选

，纯化和克隆。5兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制•反应原性和免疫原性优良：反应原性高，即使微量量的抗原物质进入机体内既能产生强烈的免疫反应，血清学上会出现很高的特意性；优良的免疫原性物质能使免疫动物产生完善的免疫应答，从而获得坚

强的免疫力•毒力应在规定的范围以内：用于制造弱毒疫苗的菌毒种，毒力应尽量弱一些；用于制造抗血清、灭活疫苗和疫苗效力检测的菌（毒）种毒力应强，且抗原性要尽量高6兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制菌（毒）种的筛选程序和内容细胞EID50ELD50TC

ID50稳定性实验冻干、冷冻或冷藏保存反应原性免疫原性血清学实验攻毒保护实验病毒分离纯粹性试验致病性试验抗原性试验原动物LD50筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗用抗体或疫苗效力检验用实验动物鸡

胚细胞反应原性纯粹性试验抗原性试验原动物致病性试验病毒分离7兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制弱毒菌（毒）种的选育弱毒菌（毒）种的选育自然弱毒株的分离人工诱变致弱同源动物（如NDVLaSota株）异源动物（HVTFC126株）化学

途径物理途径生物途径亚硝基胍醋酸坨洗衣粉高温紫外线适应非易感动物或细胞杂交减毒8兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制疫苗《制造及检验规程》•任何一种疫苗都有其《制造及检验规程》，它是国家法定标准。•疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行生产和检

验，若要改变方法，则要提供研究材料证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新《规程》才能进行生产。•《规程》来源中华人民共和国《兽用生物制品规程》（常规疫苗）转让单位（新兽药）9兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控

制厂房、设施和仪器设备•《GMP》证书是疫苗生产的准入证，疫苗生产必需拥有与生产工艺相符合的生产线•GMP生产车间设计要求功能区：抗原制备区、成品生产区、洗涤区、办公区。各区域和功能间以洁净走廊相连，严格按人流物流

分开原则进行设计。洁净度：按各功能间洁净度、压力、压差要求设计施工。有10万级区、万级区和局部百级区。六大系统：供电、供水、供汽、污水处理、净化、监控。10兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制厂房、设施和仪器设备•检验设施质检室检验

动物舍（应配备有符合各类实验动物级别饲养设施）•仓储设施原辅材料库半成品库成品库11兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制厂房、设施和仪器设备•灭菌设备：高压蒸气灭菌柜、干热箱、锅炉等；•净化设备：净化机组、无菌室、超净工作

台等；•微生物培养设施设备：温室、孵化器、细胞培养转瓶机、各种罐体、生化培养箱等；•乳化设备：各种罐体、胶体摸、高压匀浆机等；•冻干设备：冻干机；•灌装设备：洗烘连动线、自动灌装加塞联动机；•包装设备：扎盖机、帖标机；•冷藏冷冻设施设备：冷库、冷柜、液氮罐等

；•污水废弃物处理设施设备：灭菌柜、消毒罐、污水处理站；•检验仪器设施设备：各种显微镜、水分测定仪、二氧化碳培养箱、生物安全柜、动物房等。12兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制福州大北农公司总体布局图主厂房大动物房小动物房质检楼锅炉房污水处理站脾林苗仓储办公区大门生活区13兽医

生物制品学兽用疫苗生产和质量控制14兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制15兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制疫苗生产工艺流程菌（毒）种培养物（培养基、动物、禽胚或细胞等）收获抗原（培养液、含毒组织、胚液或细胞液等）配苗分装

冻干成活疫苗或灭活后制成灭活疫苗。16兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制细菌疫苗的制造流程蛋白胨、肉浸液等原料培养基配制、灭菌菌种生产用种子培养菌液菌苗原液配苗分装冻干、扎盖帖签活疫苗原料佐剂灭活菌

液配苗乳化分装、扎盖、帖签灭活疫苗灭活检验配制、灭菌保护剂原料配制、灭菌17兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制病毒性细胞疫苗的制造工艺流程健康动物（或胚胎）组织原料细胞悬液生长细胞病毒液配苗分装冻干、扎盖帖签活疫苗基础种毒生产用

种毒原料保护剂配制灭菌细胞培养液传代细胞灭活病毒液配苗（混匀、乳化）分扎盖帖签装灭活疫苗检验原料佐剂配制灭菌灭活检验配制培养收获18兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制病毒性组织疫苗的制造工艺流程感染动物或胚胎分装、扎盖、贴签健康动物或

SPF鸡胚等健康动物或SPF鸡胚等动物或SPF鸡胚等基础种毒生产用种毒收获感染组织或胚液纯化配制成含毒悬液配苗分装冻干活疫苗保护剂原料配制检验灭活病毒液配苗、乳化灭活疫苗原料佐剂配制灭活检验19兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制影响疫苗质量的关键环节•活疫苗生产用菌

（毒）种的制备是否优良制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效冻干保护剂的选择和冻干曲线的制定是否合理•灭活疫苗➢生产用菌（毒）种的制备是否优良➢制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效➢抗原灭活是否彻底➢乳化工艺是否先进20兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制疫苗抗原制造技术介绍•细菌类疫苗抗原增

殖技术（培养基增殖）细菌培养是指细菌在动物体外的人工培养基上以及人工控制的环境中（通常用培养罐进行培养）生长繁殖的过程。细菌性疫苗都是利用培养基制造的，首先通过分离培养，获得单个菌落，制备细菌种子，然后逐级培养进行规模化生产。21兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制•细菌类疫苗抗原

增殖技术（关键控制点）➢培养基质量：培养细菌类疫苗抗原的培养基一般是人工制备的一种液体培养基，它含有培养相应细菌所需营养成分，包括水、氮源、碳源、无机源和生长因子等它的好坏直接影响到产菌量和检验结果。22兽医

生物制品学兽用疫苗生产和质量控制➢生产用菌种•菌落挑选符合细菌培养特性•活菌含量符合要求•纯净无污染•代次按规定控制➢工艺的稳定性•培养条件•工艺技术（各种参数如种子接种量、培养时间、收获时间等）23兽医生物制品

学兽用疫苗生产和质量控制传统病毒类疫苗抗原增殖技术•动物增殖•禽胚增殖•细胞增殖24兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制5、疫苗检验•活疫苗➢物理性状（冻干苗）➢无菌检验（纯粹检验）➢鉴别检验：特异性血清中和检验。➢外源病毒检验（病毒类疫

苗）：中和法检验。➢活菌计数（细菌类疫苗）：平板计数。➢病毒含量测定（病毒类疫苗）：EID50、ELD50或TCID50。25兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制➢安全检验：动物或鸡胚（剂量几倍至几十倍）➢效力检验：攻毒保护或微生物含量测定。➢水份测定（冻干苗）：4%以内。➢真空度测定

（冻干苗）：白色、粉色或紫色辉光。26兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制•灭活疫苗灭活检验：半成品检测：EID50、ELD50或TCID50。物理性状：外观、剂型、稳定性、粘度检验。无菌检验：培养基检

测安全检验：动物检验效力检验：攻毒保护或测抗体。灭活剂含量测定：化学分析27兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制6、疫苗保存•疫苗对温度极为敏感，保存不当会使效价严重受损（尤其是活疫苗）或剂型破坏，并导致疫苗失效，因此应严格在规定的条件下保存。

28兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制7、猪瘟活疫苗产品介绍•种类：猪瘟活疫苗根据抗原制备途径不同又分为：•猪瘟活疫苗（成兔脾淋源）•猪瘟活疫苗（乳兔源）•猪瘟活疫苗（细胞源）•猪瘟活疫苗（牛体源）•疫苗研究和发展历史背景29兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制3.6猪瘟活疫苗产品介绍—

生产和使用对比疫苗类型使用种毒抗原制备方法质量标准生产成本临床使用猪瘟活疫苗（成兔脾淋源）猪瘟兔化弱毒接种成兔，采集兔体脾淋组织150个RID高非特异免疫强抗原含量高过敏率低猪瘟活疫苗（乳兔源）猪瘟兔化弱毒接种乳兔，采集乳兔

肌肉组织150个RID较高无非特异免疫抗原含量较低过敏率高猪瘟活疫苗（细胞源）猪瘟兔化弱毒接种牛睾丸细胞，收货细胞培养液750个RID（新标准7500RID）低无非特异免疫，抗原含量高，过敏率较高猪瘟活疫苗（牛体源）猪瘟兔化弱毒接种犊牛，采集犊牛脾淋组织150

个RID较底非特异免疫强抗原含量高过敏率低30兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制猪瘟活疫苗质量控制要素•菌毒种纯净（细菌和外源性病毒污染）含毒量高于国家标准代次控制在5代以内•原材料的选择➢组织苗家兔的选择（兔种、年龄、体重、健康状况

等）乳兔的选择（日龄、体重、健康状况等）➢细胞苗细胞的选择（无污染外原病毒等）31兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制猪瘟活疫苗质量控制要素•生产环境控制➢组织苗动物饲养条件控制接毒后动物反应观察与判断生产线功能间洁净级别要求➢细胞苗细胞检测（BVDV等）健康

细胞和接毒后细胞的观察与判断生产线功能间洁净级别要求•半成品检测•成品检测32兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制1、质量控制意义•国家强制要求禽流感事件，人血白蛋白事件•企业自身要求品牌、效益、

责任•生物制品特殊性表现在➢在生产和使用过程中人和动物的安全性（污染、混毒、人畜共患）➢对环境的安全性➢群体性危害34兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制2、质量控制要求•安全性：毒副作用、残留、环境、人类•有效性：有效成分达到要求，疗效确切•均

一性：批间、最小单元间、贮存运输后等•稳定性：贮存期稳定，有较长的有效期•方便性：给药的方式、途径•经济性：在保证质量的前提下，改进生产工艺，提高效力，降低成本35兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制3、保证措施——兽药GMP管理GMP是英文

GoodManufacturingPracticeforDrugs的缩写，直译为“优良产品的生产实践”。我国的《兽药GMP》是《药品生产质量管理规范的简称》。《兽药GMP》是在兽药生产过程中，用科学、规范化的条件和方法来保证生产优良兽药的

整套科学体系。它实施的目标就是对兽药生产的全过程进行质量控制，以保证生产的兽药质量是合格优良的。36兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制3、保证措施——兽药GMP背景•GMP是从药品生产实践中取得经验教训的总结。•人类社会经历了12次药物灾难，特别是20世

纪出现的药物灾难“反应停”事件后，公众要求制定严格监督法律；•最早的GMP是由美国坦普尔大学6名教授编写制定；•1963年美国颁布第一部GMP，美国FDA经过实施；•1975年WHO正式公布GMP，开始向成员国推荐，并确定为WHO的法规之一

，迄今为止有100多个国家实施了GMP；•我国医用药品从1982年开始颁布GMP，农业部于己于1989年颁布并决定实施GMP，规定至2005年12月31日未取得《GMP合格证》的企业，不得进行药品生产

。37兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制3、保证措施——控制要求生产、管理人员厂房、设施、设备原料、包装材料生产方法检验、监控售后服务经检验合格的经过验证的可靠的完善的经验证合适的训练有素的GMP基本控制要求影响质量的因素完善的管理文件38兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制3

、保证措施——控制要求在GMP管理要求中，3条主线贯穿全过程–生产处处防污染：原材料或产品被微生物或外来物搀杂、玷污、混杂、失真、遗漏、任意等造成产品的质量问题，生产过程对环境和人员的安全性：–事物件

件有验证：能证明任何程序、生产过程、设备、物料、活动或系统能导致预期结果，有文件证明的行动。凡是须问个为什么？怎么样？好不好？行不行？----通过验证----放心使用–工作一律守制度：有一项工作或活动就必须有一项制度；有制度

就必须执行；有执行就必须有综合（分析、检查）；有综合就有提高（改进、修订）39兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制3、保证措施——管理软件•软件：是指企业对管理体系中采用的全部要素、要求和规定编制成各种制度、标准和程序形成文件系统，在实施中及时正确地记录执行情

况且保存完整的执行记录。从组织架构、工作标准到记录（凭证）等都进行了详细的制定，它是质量控制的重要保证。40兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制工艺规程质量标准检验规程其它生产管理质量管理物料管理设备管理计量管理环境管理验证管理其它岗位操

作记录批生产记录批包装记录批检验记录物料记录计量记录环境记录设备记录验证记录其它批档案汇总岗位操作法SOP（生产操作、辅助操作、检验操作、管理等）记录专题分析批档案运行记录趋势分析文件系统技术标准管理标准工作标准41兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制3、保证措施—过程控制方法过程控制方法：监

督加检查（检验）➢人员（培训、技能等）➢原辅材料（供应商评估、小样实验、检验）➢设备仪器定期验证和校验➢生产过程监督和检查（半成品检验）➢产品检验（企业内控标准）➢批记录核查、批签发➢售后服务（运输、保存、使用注意事项、客户访问、退回产品的处理

、不良反应的处理等）42兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制3、保证措施——过程控制目标控制管理目标–把影响产品质量的人为差错，减少到最低程度–防止一切对产品的污染、交叉污染和产品质量下降的情况发生–建立完善的质量保证体系，确保

GMP的有效实施产品质量优劣取决于–企业的质量观–是否保证GMP的有效实施43兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制四、疫苗质量评价•生产过程评价•检验结果评价安全性效力稳定性•临床使用效果评价（国家标准与企业内控标准

差异）➢自家苗？44兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制五、疫苗研究发展方向•传统疫苗改进➢精制化（减少副反应）；➢规模化（改进工艺、提高产能、降低成本）；➢耐热化（有利于保存和运输）；➢多联多价化（减少动物应激）；

➢高效化（改进疫苗质量，提高内控标准，增强疫苗免疫效果，如种毒的改造、佐剂的运用等）。45兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制•新型疫苗研发：以分子生物学技术为基础，研究新型疫苗是新世纪疫苗研究的主导方向。•新病（包括变异）疫苗研发：企业与科研单位联合开发已成为趋势，一些企业成立的研发部门也在从

事基础研究和临床应用研究，为生产出高质量的疫苗奠定了基础46兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制谢谢！47兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制