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微生物的测医学宣教一、分类◼碳酸饮料(品)(汽水)类◼果汁(浆)及果汁饮料(品)类◼蔬菜汁及蔬菜汁饮料(品)类◼含乳饮料(品)类◼植物蛋白饮料(品)类◼瓶装饮用水类◼茶饮料(品)类◼固体饮料(品)类◼特殊用途饮料(品)类微生物的测医学宣教2◼总酸度、pH值、还

原糖含量◼食品中微生物的检测◼细菌总数◼大肠菌群数◼食品添加剂的检测◼甜味剂－糖精钠、甜蜜素、安赛蜜、阿斯巴甜。◼防腐剂－苯甲酸、山梨酸微生物的测医学宣教3二、微生物检验◼1、细菌总数◼菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后所得1g或1

ml检样中所含细菌菌落的总数。它可以反应食品的新鲜度、被细菌污染的程度、生产过程中食品是否变质和食品生产的一般卫生状况等。因此它是判断食品卫生质量的重要依据之一。微生物的测医学宣教4流程检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适

宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃适量营养琼脂→菌落数→报告微生物的测医学宣教5（1）样品的无菌处理◼以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1

：10的均匀稀释液。◼固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min~100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。微生物的测医学宣教6（2）稀释、接种用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿

管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。微生物的测医学宣教7◼根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌

平皿内，每个稀释度作两个平皿。◼稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿15ml，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。◼等琼脂

凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。微生物的测医学宣教9菌落计数方法◼做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。◼

平板菌落数的选择◼选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代

表全皿菌落数。微生物的测医学宣教10稀释度的选择◼应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。

◼若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。◼若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。◼若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。微生物的测医学宣教11简便方法：菌落总数测定纸微生物的测医学

宣教12使用方法微生物的测医学宣教132、大肠菌群的测定◼大肠菌群是指在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰式阴性无芽孢杆菌。◼大肠菌群数以每100ml（g）检样中大肠菌群最可能数（MPN）表示。微生物的测医学宣教14流程◼乳糖胆盐发酵管变黄浑浊，微生物的测

医学宣教15培养基配方◼乳糖胆盐发酵双料:◼(1)蛋白胨40g◼(2)牛胆盐10g◼(3)乳糖20g◼(4)蒸馏水1000ml◼(5)溴甲酚紫（1.6g/t）2ml◼(6)PH值7.2-7.4◼乳糖发酵管◼(1)蛋白胨20g◼(2)乳糖10g◼(3)蒸馏水1000ml◼(4)溴甲酚紫

（1.6g/t）1ml◼(5)PH值7.2-7.4微生物的测医学宣教16伊红美蓝培养基：◼成分：◼蛋白胨10g◼乳糖10g◼磷酸氢二钾2g◼琼脂17g◼2％伊红水溶液20ml◼0.65％美蓝水溶液13ml◼蒸馏水1000ml◼p

H为7.1◼制法：◼将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于热蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50-55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。微生物的测医学宣教17伊红美兰琼脂平板划线培养

大肠菌群的典型菌落◼（1）深紫黑色，具有金属光泽的菌落◼（2）紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落◼（3）淡紫红色、中心色较深的菌落。微生物的测医学宣教18革兰氏染色阴性菌微生物的测医学宣教19纸片法微生物的测医学宣教20

MPN表◼┌──────────────────┬─────┬─────┐◼│阴性管数│MpN│95％可信限│◼├─────┬─────┬──────┤100mL(g)├──┬──┤◼│1mL(g)，*3│0.1mL

(g)*3│0.0lmL(g)*3││下限│上限│◼├─────┼─────┼──────┼─────┼──┼──┤◼│0│0│0│＜30│＜5││◼│0│0│1│30│││◼│0│0│2│30││90│◼│0│0│3│30│││◼├─────┼─────┼──────┼─────

┼──┼──┤◼│0│1│0│30│＜5││◼│0│1│1│60││130│◼│0│1│2│90│││◼│0│1│3│120│││◼└─────┴─────┴──────┴─────┴──┴──┘◼续表◼┌───────────────────┬────┬─────┐◼│阳性管数│MPN│95

％可信限│◼├─────┬──────┬──────┤100mL(g)├──┬──┤◼│1mL(g)×3│0.lmL(g)x3│0.0lmL(g)X3││下限│上限│◼├─────┼──────┼─────

─┼────┼──┼──┤◼│0│2│0│60│││◼│0│2│1│90│││◼│0│2│2│120│││◼│0│2│3│160│││◼├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤◼│0│3│0│90│││◼│0│3│1│130│││◼│0│3│2│160│││◼│0│3│3

│190│││◼├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤◼│1│0│0│40│＜5│200│◼│1│0│1│70│10│210│◼│1│0│2│110│││◼│1│0│3│150│││◼├─────┼──────┼──────┼────┼─

─┼──┤◼│1│1│0│70│10│230│◼│1│1│1│110│30│360│◼│1│1│2│150│││◼│1│1│3│190│││◼├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤◼│1│2│0│11

0│30│360│◼│1│2│1│150│││◼│1│2│2│200│││◼│1│2│3│240│││◼├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤│1│3│0│160│││微生物的测医学宣教21革兰氏染色◼革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是

：1）涂片固定。2）草酸铵结晶紫染1分钟。3）自来水冲洗。4）加碘液覆盖涂面染1分钟。5）水洗，用吸水纸吸去水分。6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。7）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后

，自来水冲洗。干燥，镜检。染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。微生物的测医学宣教22分光光度计使用方法微生物的测医学宣教23微生物的测医学宣教24◼2．使用方法◼（1）预热仪器将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。为了防止光电管疲劳，

不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。◼（2）选定波长根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长。◼（3）固定灵敏度档使用时，调到“1”挡。◼（4）调节T=0%轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示

为“00.0”，（此时试样室是打开的）。◼（5）调节T=100%将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。◼（6）吸光度的测定将选择

开关置于“A”，盖上试样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后，

打开试样室盖，切断光路。◼重复上述测定操作1-2次，读取相应的吸光度值，取平均值。◼（8）关机实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架用软纸擦净。◼3．注意事项◼（1）为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开，使光路切断，以延长光电管的使用寿

命。◼（2）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。◼（3）比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。微生物的测医学宣教25