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血清学试验医学知识血清学试验的概念◆由于抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。2血清学试验医学知识血清学试验的特点◆特异性和交叉性◆敏感性◆可逆性◆反应的二阶段性◆最适比例与带现

象◆用已知测未知◆3血清学试验医学知识特异性和交叉性◆特异性抗原只能与相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。◆交叉性两种不同的抗原之间含有共同的抗原决定簇，则发生交叉反应。4血清学试验医学知识反应的二阶段性第二阶段抗原抗体复合物出现可见反应阶段。此阶段反应慢、需数分钟、数十分钟或

更久。第一阶段抗原与抗体的特异性结合阶段，此阶段反应快、仅数秒至数分钟，但不出现可见反应。5血清学试验医学知识敏感性◆抗原抗体的结合还具有高度敏感性的特点，不仅可检测定性，还可以定量检测微量、极微量的抗原或抗体。6血清学试验医学知识最适比例与带现象❖抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现肉眼可见反

应。抗体除IgM是5价，SIgA4价外，一般抗体都含有两个结合位点（二价）；抗原则根据分子大小，有10～50个不等的结合点。当抗原抗体比例适当时，两者结合后，尚有未饱和的结合点，可以继续与游离的抗体、抗原或与抗原抗体结合物的未饱和点相联结，逐渐

形成愈来愈大的复合物，出现了肉眼可见反应。比例最适合，出现反应最快，反应产物愈多。❖如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合，不出现可见反应，谓之带现象。7血清学试验医学知识前带后带8血清学试验医学知识可逆性◆抗原与

抗体的结合是分子表面的结合，这种结合是可逆的，结合条件为0℃～40℃、pH4～9。如温度超过60℃或pH降到3以下，或加入解离剂时，则抗原抗体复合物又可重新解离，并且分离后抗原或抗体的性质仍不改变。9血清学试验医学知识用已

知测未知◆所有的血清学试验都是用已知抗原测定未知抗体，或用已知抗体测定未知抗原。10血清学试验医学知识影响血清学试验的因素◆电解质：血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，才出现可见反应。0.9%氯化钠溶液。8-10%◆温度：在一

定温度范围内，温度越高，抗原、抗体分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速抗原抗体结合和反应现象的出现。11血清学试验医学知识◆酸碱度：血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使复合物解离，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。◆振荡：适当的机械振荡能

增加分子或颗粒间的相互碰撞，加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体复合物解离。◆杂质和异物：试验介质中如有与反应无关的杂质、异物存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应。◆12血清学试验医学知识血清学试验

的类型◆凝集试验◆沉淀试验◆补体结合试验◆中和试验◆免疫标记技术13血清学试验医学知识凝集试验的概念◆细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，经过一定时间，复合

物互相凝聚形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验。14血清学试验医学知识凝集试验的类型◆直接凝集试验◆间接凝集试验15血清学试验医学知识直接凝集试验概念：颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，直接结合，凝集成团的现象，称直接凝集试验。类型：按其操作方法可分为玻片法和试

管法。16血清学试验医学知识1．玻片凝集试验◆方法：在玻璃板或瓷片上进行。◆特点：简单、快速。◆用途：定性试验，如细菌鉴定、血型鉴定等。17血清学试验医学知识2．试管凝集试验◆方法：在试管中进行。◆特点：准确、耗时。◆用途：定量试验，如诊断布氏杆菌病，测定抗体的

凝集价。18血清学试验医学知识19血清学试验医学知识❖结果判定❖结果用“+”表示反应强度。❖++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底。❖+++：液体透明，菌体基本被凝集沉于管底。❖++：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀。❖+：

液体透明度不明显或不透明，有不明显的沉淀或有沉淀的痕迹。❖—：液体不透明，呈均匀混浊，管底无凝集。有时有少量菌体集中于管底中心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。❖以出现“++”的最高血清稀释倍数即

为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物（马，牛，骆驼等）以凝集价1：100以上判为阳性，1：50的凝集价判为可疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1：50以上判为阳性，1：25的凝集价判为可疑。❖如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。20血清学试验医学知识间接凝集试验概念：将可溶性

抗原或抗体与载体连接后，再与相应的抗体或抗原作用，所出现的特异性凝集反应为间接凝集试验。类型：间接血凝试验乳胶凝集试验协同凝集试验21血清学试验医学知识致敏红细胞红细胞抗原红细胞抗原致敏红细胞被检抗

体红细胞凝集间接血凝试验原理22血清学试验医学知识23血清学试验医学知识❖凝集强度判定❖＋（100%红细胞凝集）：边缘不整齐，有红色颗粒布满孔底）❖±（50%红细胞凝集）V型孔：孔底可见红色颗粒，中央有少量红细胞沉淀❖－

红细胞呈点状沉于孔底，无红色颗粒。❖能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，为该病毒的红细胞凝集滴度，即一个凝集单位。如表18-1-1的病毒血凝滴度为27，即将病毒原液作27倍稀释，其中含一个血凝单位的病毒。❖由于病毒血凝抑制试验中需要的病毒液应含4个血凝单位，因此，需要对原病毒

液进行25倍稀释。24血清学试验医学知识以能使100%红细胞不发生凝集的血清最大稀释倍数为该血清的HI滴度，以2的指数表示。25血清学试验医学知识沉淀试验的概念◆可溶性抗原与相应的抗体结合，在适量电解质存在下，经过一定时

间，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验。26血清学试验医学知识沉淀试验的类型◆环状沉淀试验◆琼脂凝胶扩散试验◆免疫电泳27血清学试验医学知识环状沉淀试验◆方法：在小口径试管中进行。◆原理：试管内，下层沉淀素与上层沉淀原在液界面应形成白色沉淀

环。◆用途：主要用于抗原的定性试验，如炭疽杆菌的Ascoli试验、链球菌的血清型鉴定、血迹鉴定等。白色沉淀环沉淀原沉淀素28血清学试验医学知识琼脂凝胶扩散试验◆原理1%琼脂凝胶孔径为85nm，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成沉淀线。

29血清学试验医学知识双向双扩散方法◆此法系采用1%琼脂倒于平皿或玻片上，制成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、抗体分别滴入孔内，放置湿盒中，在37˚C湿箱中24-72h后观察。31血清学试验医学知识双向双扩散用途◆◆抗原的比较和鉴定：在抗原与抗体孔间形成沉淀带。每一

种抗原成分出现一条沉淀带。如两个相邻孔之间抗原相同，则沉淀带融合，如1、2；抗原不同，则互相交叉，如3；部分相同则部分融合，另外不同部分则交叉，如4。32血清学试验医学知识免疫电泳◆免疫电泳技术是把凝胶扩散试验与电泳技术相结合的免疫检测技术。即将琼脂扩散置于直流电场中进行，让电流来

加速抗原与抗体的扩散并规定其扩散方向，在比例合适处形成可见的沉淀带。33血清学试验医学知识补体结合试验◆试验系统、原理和结果判定反应系统已知抗原（抗体）待检血清（抗原）补体绵羊红细胞溶血素如溶血则为阴性如不溶血则为阳性指示系统反应结果的判定34血清学试验医学知识35血清学试验医学知

识中和试验◆概念：根据抗体能否中和病毒的感染性而建立的免疫学试验。◆原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易感动物、鸡胚或细胞活性。◆举例IBDV9～11d鸡胚24～48h鸡胚死亡IBDV+抗血清9

～11d鸡胚鸡胚不死亡36血清学试验医学知识免疫标记技术◆抗原与抗体结合了，但复合物小，不能通过凝集或沉淀用肉眼观察到。该怎么办？◆将抗体或抗原联结在一个特定的易于检测的物质上，通过检测特定物质的存在，间接反映抗原抗体发生了结合。37血清学试验医学知识荧光抗体标

记技术◆原理：将荧光色素标记在抗体或抗原上，与相应的抗原或抗体特异性结合后，用荧光显微镜观察所标记的荧光，以分析示踪相应的抗原或抗体的方法。◆荧光素：荧光色素是能产生明显荧光，又能作为染料使用的有机化合物。最常用的是异硫氰酸荧光素(FITC)。38血清学试验医学知识荧光抗体染色染色

方法抗补体法直接法间接法抗原抗体荧光素抗抗体抗补体抗体39血清学试验医学知识酶标抗体技术◆原理：将酶分子标记在抗体或抗原分子上，利用抗原抗体反应的特异性及酶的高催化活性进行检测。◆用于标记的酶：辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。◆40血清学试验医学知识免疫酶组织

化学染色技术酶联免疫吸附试验斑点-酶联免疫吸附试验酶标抗体技术分类41血清学试验医学知识酶联免疫吸附试验◆试验方法间接法：用于测定抗体夹心法：用于测定大分子抗原双夹心法：用于测定大分子抗原◆原理通过化学方法将酶与抗体结合起来。酶标记后的抗体仍

然保持着能与相应抗原结合的免疫学活性及酶的催化活性。酶标抗体与抗原结合后，形成酶标抗体-抗原复合物。复合物上的酶，在遇到相应的底物时，催化底物分解，使底物中的供氧体由无色的还原型变成有色的氧化型，呈现颜色反应，用肉眼或酶标仪

判定结果。42血清学试验医学知识◆目前已广泛于应用多种细菌病和病毒病的诊断和检测。如猪传染性胃肠炎、鸡新城疫、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病、蓝耳病、猪瘟、口蹄疫等传染病的诊断和抗体监测常用此技术。酶联免疫吸附试验应用43血清学试验医学知识❖方法：❖1.样本稀释❖2.加样

❖3.温育❖4.洗涤❖5.加酶标二抗❖6.温育❖7.洗涤❖8.加底物❖9.避光显色❖10.终止反应❖11.结果测定44血清学试验医学知识