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新细胞培养医学课件11、不为五斗米折腰。12、芳菊开林耀，青松冠岩列。怀此贞秀姿，卓为霜下杰。13、归去来兮，田蜀将芜胡不归。14、酒能祛百虑，菊为制颓龄。15、春蚕收长丝，秋熟靡王税。细胞原代培养一、组织块培养法实验目的原代培养方法之一：组织块法设备与器材设备器械试剂材料超净工作台设备与器

材设备器械试剂材料培养箱CO2设备与器材设备器械试剂材料倒置显微镜设备与器材设备器械试剂材料水浴锅设备与器材设备器械试剂材料解剖器材设备与器材设备器械试剂材料玻璃器皿设备与器材设备器械试剂材料其它器材设备与器材设备器械试

剂材料液与培养液PBS设备与器材设备器械试剂材料小牛血清设备与器材设备器械试剂材料怀孕大白鼠培养要点一）材料新鲜二）严格无菌操作三）剔除脂肪等附着组织四）组织块剪小（直径<1mm），摆开放（间距>5mm）操作演示处死解剖

冲洗剪碎培养观察击头致死操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察酒精浸泡操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察送入无菌室操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察再次消毒操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察剪开皮肤、腹肌、腹膜操作演示

处死解剖冲洗剪碎培养观察取出胎鼠操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察挑开胎鼠腹腔取出肝组织操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察PBS液冲洗（4~5次）操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察剔除其它组织操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察PBS液再次冲洗操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察

剪碎肝组织操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察将组织移入培养瓶操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察加入培养液37°C培养操作演示处死解剖冲洗剪碎培养观察一天后倒置显微镜观察初学者易犯的错误操作中不更换器械冲洗次数不够组织碎

片太大组织块摆放太密培养液加入太多初学者易犯的错误操作中不更换器械冲洗次数不够组织碎片太大组织块摆放太密培养液加入太多初学者易犯的错误操作中不更换器械冲洗次数不够组织碎片太大组织块摆放太密培养液加入太多初学者易犯的错误操作中不更换器械冲洗次数不够组织碎片太大组

织块摆放太密培养液加入太多初学者易犯的错误操作中不更换器械冲洗次数不够组织碎片太大组织块摆放太密培养液加入太多二、消化培养法实验目的掌握消化法培养原代细胞的步骤设备与器材设备、器械、试剂、材料都与原代培养基本相同。新需试剂有……胰蛋白酶液设备与器材血球计数板、

器培养要点肝组织剪碎至1mm³左右。合适的胰蛋白酶浓度（通常为0.25%）合适的消化时间：消化时，待组织块变得较疏松，颜色暗白为止（通常为37°C20~40分钟之间）实验材料，前期步骤同细胞原代培养。将剪碎的鼠肝脏组织进行消化……操作演示加胰蛋白酶液消化

准备取材剪碎冲洗消化过滤离心加培养液计数分装培养观察操作演示37°C水浴锅内消化准备取材剪碎冲洗消化过滤离心加培养液计数分装培养观察操作演示过滤准备取材剪碎冲洗消化过滤离心加培养液计数分装培养观察操作演示平衡、离心准备取材剪碎冲洗消化过滤离心加培养液

计数分装培养观察操作演示弃胰蛋白酶液，加入培养液准备取材剪碎冲洗消化过滤离心加培养液计数分装培养观察操作演示细胞浓度以5x10为宜。准备取材剪碎冲洗消化过滤离心加培养液计数分装培养观察5操作演示分装准备取材剪碎冲洗消化

过滤离心加培养液计数分装培养观察操作演示培养准备取材剪碎冲洗消化过滤离心加培养液计数分装培养观察操作演示24小时后倒置显微镜下观察准备取材剪碎冲洗消化过滤离心加培养液计数分装培养观察初学者易犯的错误水浴锅未预热组织块太

大胰蛋白酶消化不足或过度吹打用力过度初学者易犯的错误水浴锅未预热组织块太大胰蛋白酶消化不足或过度吹打用力过度初学者易犯的错误水浴锅未预热组织块太大胰蛋白酶消化不足或过度吹打用力过度初学者易犯的错误水浴锅未预热组织块太大胰蛋

白酶消化不足或过度吹打用力过度细胞传代培养实验目的细胞在原培养瓶内分离稀释后传到新培养瓶的操作叫传代。要获得稳定的细胞株或得到大量同种细胞，当培养细胞形成致密的单层后需要进行传代培养。实验材料培养瓶里已长成单层的细胞演示操作传代前准备1.预

热培养用液2.用75%酒精擦拭双手和工作台面3.摆放使用器械4.点燃酒精灯5.取出已预热的培养用液6.从培养箱中取出细胞7.各种器皿火焰消毒演示操作传代前准备胰蛋白酶消化1.加入消化液2.显微镜下观察细胞3.吸弃消化液，加入培养液演示操作传

代前准备胰蛋白酶消化吹打分散细胞1.吹打制悬2.吸细胞悬液入离心管3.平衡离心4.弃上清液，加入新培养液演示操作传代前准备胰蛋白酶消化吹打分散细胞分装稀释细胞1.分装2.显微镜下观察细胞演示操作传代前准备胰蛋白酶消化吹打分散细胞分装稀释细胞继续培养用酒精棉球擦拭培养瓶，旋松瓶口，放入CO2培养箱

中培养。注意事项严格无菌操作污染细胞未污染细胞瓶口碰到酒精灯X手在瓶口上方移动X注意事项严格无菌操作适度消化未消化细胞细胞消化过程细胞计数实验目的学习并掌握培养细胞数目的测定方法学会使用血球计数板设备与器材设备、器械、试剂、材料都与传代培养基本相同。新

需试剂有……设备与器材光学显微镜设备与器材台盼蓝0.4%实验原理当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中细胞的数目，即可换算出每毫升悬液中的细胞数目。操作演示准备工作取一瓶传代的细胞，按《传代细胞培养方

法（消化法）》介绍的方法繁殖细胞，待长成单层后以备使用。操作演示准备工作细胞悬液的制备用0.25%的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液（或Hanks液，PBS等平衡溶液），吹打制成待测细胞悬液。操作演示准备工作细胞悬液的制备细胞计数盖好盖玻片制备计数用的细胞悬液将细胞

悬液滴入计数板统计四个大格的细胞数计算细胞悬液细胞数操作演示准备工作细胞悬液的制备细胞计数细胞计数要点初学者易犯的错误未将悬液吹打均匀X初学者易犯的错误未将悬液吹打均匀X盖玻片下有气泡X初学者易犯的错误未将悬液吹打均匀X盖玻片下有气泡X细胞悬液流入

槽中X细胞冻存实验目的学习掌握细胞冻存技术了解培养细胞的运输方法设备、器械和试剂设备、器械、试剂、材料都与原代培养基本相同。新需器材、试剂有……液氮罐-20°C冰箱-80°C冰箱冻存细胞登记本手套、冻存管等甘油、二甲亚砜实验原理细胞培养

的需要实验原理细胞培养的需要直接冷冻的危害冰晶形成实验原理细胞培养的需要直接冷冻的危害细胞冻存的原则加保护剂：甘油或二甲亚砜（DMSO）可使细胞内冰点下降：膜透性增加。缓慢冷冻：细胞内水份逐步均匀的减少，避

免冰晶大量形成。冻存方案标准方案室温~-25°C：降温速率是1~2°C/min；~25~-100°C：降温速率是5~10°C/min；-100°C以下：直接放入液氮中。标准冻存方案冻存方案标准方案简易冻存

方案简易冻存方案冻存管用厚棉花分隔，放入盒子中；置于-20°C冰箱内2小时；立即转入-80°C冰箱内4小时；再迅速置入-196°C液氮内长期保存。操作演示细胞冻存细胞冻存一、筛选细胞1、观察细胞2、做标记3、换培养液细胞冻存一、筛选细胞二、细胞消化（第二天）细胞消化方法同传代培养细胞消化。

细胞冻存一、筛选细胞二、细胞消化（第二天）三、细胞离心细胞离心按传代培养离心标准，收集细胞。细胞冻存一、筛选细胞二、细胞消化（第二天）三、细胞离心四、细胞计数细胞计数细胞冻存一、筛选细胞二、细胞消化（第二天）三、细胞离心四、细胞计数五、分装细胞1、弃去上清液2、加入冻存液3、装入冻存管4、用棉

花包装细胞冻存一、筛选细胞二、细胞消化（第二天）三、细胞离心四、细胞计数五、分装细胞六、简易冻存1、-20°C冰箱预冻2、-80°C冰箱预冻3、作好标签4、液氮罐中冻存5、登记入册冻存注意事项细胞复苏实验目的掌握细胞复苏的方法设备、器械和试剂同上述细胞冻存……实验原则操作演示一

、实验前准备查找电脑上细胞记录冻存本上查找细胞水浴锅37°C预热操作演示一、实验前准备二、取出冻存管寻找标签取出冻存管操作演示一、实验前准备二、取出冻存管三、迅速解冻在水浴锅内迅速解冻酒精棉球擦拭冻存管操

作演示一、实验前准备二、取出冻存管三、迅速解冻四、平衡离心平衡离心按传代培养离心标准，收集细胞。操作演示一、实验前准备二、取出冻存管三、迅速解冻四、平衡离心五、制备细胞悬液吸出上清液加入培养液吹打制悬操作演示一、实验前准备二、取出冻存管三、迅速解冻四、平衡离心五、制备细胞

悬液六、细胞计数细胞计数详细方法参考细胞计数实验细胞稀释浓度5x10/ml5操作演示一、实验前准备二、取出冻存管三、迅速解冻四、平衡离心五、制备细胞悬液六、细胞计数七、培养细胞分装培养完56、书不仅是生活，而且是现在、过去和未来文化生活的源泉。——库法耶夫57、生命不可

能有两次，但许多人连一次也不善于度过。——吕凯特58、问渠哪得清如许，为有源头活水来。——朱熹59、我的努力求学没有得到别的好处，只不过是愈来愈发觉自己的无知。——笛卡儿60、生活的道路一旦选定，就要勇敢

地走到底，决不回头。——左拉