【文档说明】医学实验动物学03-第三章-微生物与寄生虫质量控制-课件.ppt，共(89)页，3.673 MB，由小橙橙上传

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第三章实验动物微生物学和寄生虫学及其质量控制Page▪2实验动物的体表、粘膜和消化道内容物中微生物共生微生物丛病原体条件致病烈性传染病对宿主有益对动物和实验产生不良影响实验动物群全部毁灭影响人类健康Pa

ge▪3第一节实验动物防疫的基本概念第二节实验动物微生物学和寄生虫学等级分类第三节、第四节合格动物群中常见微生物和寄生虫污染及其影响第五节实验动物微生物学和寄生虫学质量检测Page▪4传染源传播途径易感动物第一节实验动物防疫的基本概念

一、实验动物传染病流行的基本环节Page▪5传染源（1）人源性（2）动物源性▪引起传染的条件（1）要有病原性和一定的毒力（2）侵入体内的病原体要达到一定的数量（3）病原体要有适当的侵入门户Page▪6传播途径▪切断传播途径是控制传染病的主要措施。（1）、直接传染：健康动

物与患病动物（包括携带病原体动物）直接接触而感染。如狂犬病病毒、猴B病毒、艾滋病病毒等。①水平传播：实验动物群体中互相的传播。传播途径包括消化道、呼吸道或皮肤粘膜创伤等。如沙门氏菌常经消化道感染；仙台病毒常经呼吸

道；布氏杆菌病常由配种直接感染等。②垂直传播：由母体通过胎盘将病原体传给胎儿，例如支原体、细小病毒等。Page▪7间接传播（一）非生物性传播：a、经空气飞沫、尘埃传播；b、以饲料、垫料传播；c、经饮水和饮水用具传播；d、经笼器具传播。（二）生物性传播：a、节肢动物：苍蝇、蚊子、蟑螂、

蚤、虱、蜱、螨等。b、野生动物：野生啮齿类动物，常携带各种病原体，例如携带流行性出血热病毒的野鼠的尿污染实验动物的垫料、饲料。c、实验动物：从外部新购入的实验动物，未经严格检疫和隔离。d、饲养、实验人员不注意卫生防疫传染病原体；有些人兽共患病，也可经人传播给实验动物，例如结核、布氏杆菌病等。Pag

e▪8易感动物1）种类（品种）2）年龄3）营养状况4）机体的抵抗力5）机体防御器官状况Page▪9在医学和兽医学研究领域，疫苗接种和药物治疗是预防传染病的有效手段。但是实验动物一般不采取疫苗接种和药物治疗，主要由于实验动物的特殊性：1、应用疫苗或治疗制剂可能干扰实验结果。2、经过治

疗或免疫的动物，外表健康，但可能是带菌或带毒者，可能成为潜在的传染源。3、对于小型实验动物，治疗措施可能在经济上不合算Page▪10实验动物卫生防疫主要包括以下几个方面的内容：1、平时的预防措施2、发生疫病时的扑灭措施3、消毒措施4、隔离措施Page▪11第二节实验动物微生物学和寄生

虫学等级分类Page▪12一、普通动物Page▪13饲育在开放环境里,使用的垫料和饲料,只消毒不灭菌;其饮水须符合城市饮用水标准。普通动物只能用于教学实验和某些科研工作的预实验。Page▪14二、清洁动物Cleananimal(C

N),亦称最少疾病动物,MinimalDiseaseanimal(MD)。必须是不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体，又不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原体。Page▪15清洁动物通常来自屏障环境的SPF动物的后代或降级；饲育在

屏障环境中；饲育所用的垫料，饲料，饮水和用具等均应经过高压蒸汽消毒。工作人员需穿无菌服装才能进行饲育或实验操作。Page▪16三、无特定病原体动物SPF不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体；又不携带对动物危害大和对科学研究干扰大

的病原体；还不携带主要潜在感染或条件致病菌和对科学实验干扰大的病原体的动物。Page▪17SPF动物的饲育通常是:先培育出无菌动物或悉生动物;然后,再将其后代转移到屏障环境内饲育繁殖建群。Page▪18四、无菌动物germfreeanimal(GF)动物

体内外无可检出的一切生命体的动物。此种动物在自然界中并不存在,必须用人为的方法培育。Page▪19无菌动物的取得和饲育环境▪子宫摘除术（剖腹产）▪饲育在隔离环境（隔离器内）▪一切用品经过严格包装、严格灭菌后，通过传递仓送入隔离器▪通过手套进行间接实验操作Page▪20五、悉生动物(Gnotob

ioticAnimals,GN)动物体内外所携带的生命体是已知的。此种动物原是无菌动物，系人为的将指定微生物丛定居其体内外。Page▪21GF、GN和SPF隔离环境GF动物植入GN动物污染GF动物植入污染屏障环境SPF动物Page▪22实验动物微生物学分类模拟图人兽共患病原体动物传染病原体

影响实验微生物所有微生物已知微生物普通级动物清洁级动物SPF级动物无菌动物悉生动物Page▪23不同微生物学等级的实验动物比较项目GFSPFCV传染病无无有或可能有寄生虫无很少有或可能有实验结果准确较准确有疑问应用动物数少量少量多或大量长期实验效果可能好可能好困难死亡率很低

低高长期实验存活率约100％约90％40％左右实验标准设计可能可能不可能统计价值很好较好不准确实验结果的价值很高高有疑问实验动物微生物学标准国家或国际组织动物应排除病毒项目ICLAS小鼠/大鼠14/9中国小鼠/大鼠5+6/7芬兰小鼠/大鼠16/8日本小鼠/大鼠8/9美国小鼠/大鼠（9）10/

8澳大利亚小鼠/大鼠13/8荷兰小鼠/大鼠11/10实验动物微生物学标准国家或国际组织动物细菌真菌支原体ICLAS小鼠/大鼠13/12中国小鼠/大鼠8+8/9+7芬兰小鼠/大鼠11+9/10+9日本小鼠/大鼠10/10

美国小鼠/大鼠（16）13/12澳大利亚小鼠/大鼠12/12荷兰小鼠/大鼠7/18Page▪26第三节实验动物群中常见微生物和寄生虫污染及其控制一.普通级合格动物中弓形虫污染弓形虫是一种人畜共患的寄生虫，小鼠，大鼠，地鼠，豚鼠，家兔和非人灵长类实验动物及猫，牛，羊，猪

等都能感染。Page▪27弓形虫是细胞内寄生虫，根据不同发育阶段分为五型：滋养体和包囊出现在中间宿主体内，裂殖体，配子体和卵囊只出现在终宿主－－猫体内。Page▪28滋养体排出体外,发育成熟,具感染性

卵囊口,鼻,咽,呼吸道粘膜,眼结膜和皮肤机体有免适疫宜发育宿主体内无性繁殖,引起发病急性力条无件症下终宿主受精宿主产生状免疫力感染肠绒毛上皮细胞内发育包囊裂殖体合子雌雄配子体滋养体经猫消化道侵入肠上皮细胞发育繁殖Page▪29弓形虫感染可引起肠粘膜和肠系膜淋巴，心、眼、肾上腺、脾、

脑、肺、肝、胎盘及肌肉组织的坏死和损伤。在病畜和带虫者的肉、内脏、血液、渗出液和排泄物中均有弓形虫，甚至从乳中也能分离出弓形虫，也可引起感染。Page▪30弓形虫污染的预防………实验动物设施内要保持清洁，定期消毒，严格阻断猫及其排泄物对设施、饲

料、垫料和饮水的污染。尽一切可能消灭野鼠。Page▪31二.清洁级合格动物中的仙台病毒和小鼠肝炎病毒的污染Page▪32仙台病毒属于副粘病毒科,副粘病毒属,与人类HA－2病毒同被归入副流感病毒Ⅰ型,它们之间有密切的抗原关系。现在认为:啮齿类实验动物是仙台病毒唯一自然宿主。Page▪33仙

台病毒除了鼻内途径外，其它途径均不引起小鼠的自然感染。偶尔可在肾、肝、脾、等器官发现病毒，但在尿、血和肠内则没有病毒。Page▪34▪在自发性流行中抵抗力大的小鼠如SJL/j等死亡率接近0％，高度易感小鼠如Swiss裸鼠则可接近100

％。▪感染的裸鼠其疾病症状出现的时间比有免疫机能的小鼠稍晚，并伴有进行性消瘦。在较长的时间里陆续死亡。Page▪35普通级鼠群中仙台病毒感染是最难控制的病毒感染之一凡新引进的动物必须经8周检疫(检查引入动物和“哨兵”动物的病毒抗体)。一旦在屏障环境内的鼠群中检出仙

台病毒抗体阳性，若不及时清除所有被感染动物，将导致屏障设施的失败。Page▪36两种方法1.消灭已感染鼠群,重引符合标准的种鼠或用无菌技术剖腹取胎重建繁殖群。2.暂停繁殖，在相对静止条件下保存这种非繁殖群直至感染消除(约2

个月)，然后恢复繁殖。Page▪37小鼠肝炎病毒(MHV)属冠状病毒科，冠状病毒属，与人冠状病毒(普通感冒可有肺炎)，大鼠冠状病毒(新生大鼠肺炎)，大鼠唾液腺病毒(唾液腺，泪腺炎)同属。有多种毒株。Pag

e▪38消瘦型肝炎病毒是实验小鼠最重要的病毒感染之一。呈世界范围性分布，无明显的季节性差异。多数情况下是亚临床感染或慢性感染。临床表现为肝炎，脑炎和肠炎。急性发病的临床症状：被毛粗乱，小鼠倦怠，营养不良，脱水，体重减轻。同笼老鼠挤做一团，肌肉震颤，尿色变深，针刺时不愿移动等。老

龄老鼠倾向于发生脱水和消瘦。Page▪39MHV传播方式有经空气和接触两种。小鼠是唯一能自然感染MHV;通过脑内接种,可实验感染小鼠,大鼠和地鼠,但兔和豚鼠无反应。Page▪40MHV是普通级实验小鼠难以清除的病毒之一。唯有对小鼠进行胚胎移植术、剖腹取胎术,结合屏障环境内维持饲养,才能培育

无MHV感染的清洁级以上小鼠。必须注意MHV垂直传播的可能性。Page▪41通过定期检测,有利及时发现屏障环境内的鼠群中鼠肝炎病毒感染。及时消灭被感染的鼠群。重新引进符合标准的种群。同步交配代乳方法重建繁殖群。用胚胎移植、无菌剖腹重建繁殖群。暂停繁殖方法重建繁殖群。Pag

e▪42孕母鼠自然分娩的新生鼠在分娩后的24小时内传给符合标准的代乳鼠带乳。然后在代乳鼠3周龄,6周龄和12周龄进行血清学检测,可获MHV阴性小鼠。Page▪43暂停繁殖法：从感染群中移去所有新生鼠,离乳

鼠和妊娠鼠。停止繁殖15周,可排除感染。15周后出生的第一代新生在3－4周龄MHV血清阳性,四周后因从母方获得的抗体衰退而血清阴性。在第二代小鼠3－9周龄MHV血清阴性。Page▪44三.SPF级实验动物中的细菌污染1.绿脓杆菌2.金黄色葡萄球菌

3.肺炎克雷伯氏杆菌Page▪45•绿脓杆菌是动物和人类胃肠道的一种常在菌。实验动物可经口咽和胃肠途径感染；常可在小鼠的口咽部和肠道发现。Page▪46该菌可导致远交群小鼠(Swiss-Webster)和近交系小鼠(C3H)斜颈和转圈症状，被看作是小

鼠疾患的主要细菌病原。对免疫环境遭受损害或抑制的宿主，绿脓杆菌可穿过局部淋巴环境和血管环境，导致致死性败血症。Page▪47因正常人皮肤中也可携带绿脓杆菌,由屏障环境内的工作人员带入屏障环境。在常规小鼠群的饮水器中能检到绿脓杆菌。在温暖、潮湿的环境中(如

SPF小鼠饲养室的淋浴更衣处)也常检到这种菌。Page▪48要预防或绿脓杆菌,就必须定期对SPF小鼠进行微生物学监测，及时淘汰被感染的鼠群。通过酸化(用盐酸调整PH2.5)氯化(10ppm)饮水来预防饮水器对SPF小鼠的感染;对屏障环境的淋浴更衣室常规进行彻底打扫消毒灭菌并要求进入屏障环境

的工作人员严格执行操作规程和个人防护用品的穿戴。Page▪49金黄色葡萄球菌在小鼠皮肤和粘膜上，常检到致病的金黄色葡萄球菌和一般不致病的表皮葡萄球菌。虽然金黄色葡萄球菌还没有被广泛看作实验小鼠的原发性疾病，但有些文献中报道了其作为皮肤感染，淋巴感染或

粘膜感染病原学因子。Page▪50小鼠自发性葡萄球菌感染与小鼠品系，营养及屏障环境的操作管理有关。幼鼠比成鼠易感。无胸腺裸小鼠因缺少保护性被毛并缺乏T－细胞而经常发生皮肤和眼窝的葡萄球菌感染。Page▪51据对S

PF设施的细菌学监测发现，从健康SPF小鼠分离的金黄色葡萄球菌的噬菌体型常与从动物管理员体表分离的品系一致。的凝固酶阳性葡萄球菌的培养和噬Page▪52通常不能治疗或根除金黄色葡萄球菌；饲养人员和实验人员严格执行隔离措施和操作细则；唯有通过定期检测及时淘汰患鼠；酸化饮水；饲料和垫料

彻底灭菌；经常更换垫料。Page▪53克雷伯氏菌人和动物的肠道常在菌，是与人和动物泌尿，呼吸道感染有关的条件性致病菌。小鼠自发爆发的疾病临床症状是：食欲不振，弓背，被毛粗乱，打喷嚏及呼吸深快。Page▪54为了从受

感染的小鼠中清除这种病原体，就需要进行剖腹产和严格的屏障环境。Page▪55第五节实验动物微生物学和寄生虫学质量检测一.检测目的二.检测方法三.检测规则Page▪56一、检测目的Page▪571.排除人兽共患病，确保从事实验动物生产的饲养人员和动物实验的科研或教学

人员身体健康。Page▪582.排除危害实验动物的常见病多发病，确保实验动物种群的健康，为生命科学研究提供合格的实验动物。1〕对新引进的普通级动物进行检疫，防止人兽共患病原体或动物烈性传染病带入实验动物种群，或传播给实验人员。2〕定期对生产

繁殖的实验动物种群进行抽样检测，及时了解实验动物生产群体中微生物学和寄生虫学质量；必要时作出淘汰或降级处理。3〕当实验动物种群发生传染病流行时，检出感染途径，提出控制或预防措施。4〕对实验动物生产或实验设施进行静态和动态检测，及时掌握实验动物环境条件，了解是否符合实验动物国家标准。Page▪6

13.研究确定实验动物微生物学和寄生虫学等级标准的划分，和不同等级实验动物的微生物学和寄生虫学质量指标。4.确保使用实验动物的药品和生物制品的质量，保证进行动物实验的科学研究成果和各种动物试验结果的可靠性、准确性和重复性。二.检测方法方法要求：1.国内

外通用,比较成熟,便于交流。2.可操作性强，检测结果易判断，检测率较高。3.易实现标准化和规范化，便于推广。Page▪65国家推荐性标准▪《实验动物微生物学检测方法1～4》GB/T14926.1～14926.64－2001▪《实验动物寄生虫学检

测方法》GB/T18448.1～18448.10－2001Page▪661.实验动物病毒学检测方法目前我国对实验动物病毒学检测通常使用血清学方法，包括：1.酶联免疫吸附试验（ELISA）2.免疫荧光试验（IFA）3.免疫酶染色试验（IEA）4.血球凝集（HA）和血球

凝集抑制（HI）试验Page▪672.实验动物细菌学检测方法通常采用细菌分离和培养方法。根据培养基上菌落特征，将分离到的可疑菌落作生化鉴定。Page▪68检测人员的实际工作经验，直接影响到其对检测结果的判断准确性。对部分细菌，如沙门氏菌，支原体等已开展血清学方法

检测。泰泽氏病原体不能在人工培养基上生长，目前还以病变组织压片镜检进行检测，并结合病理学检查结果作出判断。Page▪693.实验动物寄生虫学检测方法通常在光学显微镜下查找寄生虫的虫体、虫卵或孢子。对人兽

共患的弓形虫，则采用各种血清学的方法进行检测。三.检测规则1.检测频率拟以间隔23个月为宜。在实验动物的国家标准中，即规定：每3个月至少检测1次。Page▪71病原体刚侵入实验动物群体时,较易分离到病原体;而当流行趋

于平静可能分离不到病原体,但特异性抗体的检出率上升。通常在23个月内，抗体检出率不会下降太大。随着时间的推移，某些个体的抗体效价水平会下降，以及新生的非感染动物增加，使抗体阳性动物的检出大量减少。Page▪722.取样数量通常对于动物群体中感染率高的病原体，只需少量采

样就能检出；而当感染动物比例低时，若不增加取样数量，就可能漏检。因此，可根据实验动物群体中病原体的感染率决定取样数量。如病原体感染率为1％，要检出感染动物至少应取样100只。Page▪73病原体检测取样数量

感染率%检测可信度99％95％90％9022180322704326054350754409653013972021141110442922Page▪74达标的实验动物须排除的病原体感染率应为“0”,取样数量须达60-90%以上，其检测结果的可信度方可达到95-99%。而啮齿类实验动物采样，通

常都牺牲被检测动物;且实验动物寄生虫学质量检测通常与微生物学质量检测同时进行，而病原体的感染率不可能相同。因此,在标准中采用的取样数量和取样方法，将适当参考实验动物群体大小，兼顾绝大多数病原体的感染率，以决定取样数量;并规定取样点。Page▪75实验动物不同生产群体取

样数群体规模，只取样数量，只<100>5100～500>10>500>20每只隔离器检测2只Page▪76活体取样对实验动物的活体取样未作规定。无特殊要求时，对鸡、兔、犬和猴的活体取样，可在生产繁殖设施内进行。Page▪77第十章生物安全Page▪78

一、生物安全的定义针对生物医学专业或现代生物技术的开发和应用，造成对人体健康和生态环境的潜在威胁，而应采取的一系列有效预防和控制的措施。Page▪79广义的生物安全包括(1)人类的健康与安全;(2)人类赖以生存的农业生物的安全;(3)与人

类生存息息相关的生物多样性，即环境生物安全。Page▪80生物危害主要来自：1.野生动物所感染的各种微生物2.不合格实验动物所携带的各种人兽共患病的病原体Page▪81野生动物所感染的各种微生物生物危害实验人员或饲养人员环境的污染生态环

境、生物多样性存在着潜在着威胁不合格实验动物所携带的各种人兽共患病的病原体Page▪82忽视生物安全的行为1.午餐与标本同存于实验室冰箱内；2.在实验室内抽烟、进食、喝饮料；3.不戴手套清洗未消毒的玻璃器皿；4.穿着实验服去食堂午餐、到会场开会；Page▪835.随意使用来源不清，质量

不明的动物进行实验；6.生物垃圾与生活垃圾混淆一起处理；7.坚持使用传统的超净工作台，不添置生物安全柜；超净工作台Ⅰ级生物安全柜Ⅱ级生物安全柜超净台与生物安全柜Page▪85WHO对感染性微生物分类标准等级危险度传播结果Ⅰ对人和城乡社会的危险度低。不可能引起

人类疾病，或引起兽医学上重要动物疾病的微生物。Ⅱ对人有中等危险度，对城乡社会有轻微危险性。对人或动物虽有致病性，但对实验室工作人员，对社会、家畜、环境等不会造成重大灾害的病原体。在实验室内接触可能发生严重感染，但有有效的防治

方法，传播可能性不大。Ⅲ对人危险度高，对城乡危险性低。人感染了会引起重症疾病，但传播给其他人的可能性低Ⅳ对人和地区社会有高度危险性能引起人或动物的重症疾病，患者易于直接或间接传播给其他人。Page▪86世界各国考虑因素1.感染性微生物的致病程度。2.病原体的传播方式和

宿主的范围，包括人群中的免疫现状，人口密度与流动、传播媒介与环境卫生水平等实际情况。3.当地对传染病的预防措施，包括：预防免疫和抗血清的使用；卫生措施包括：食品和饮用水的卫生，控制动物宿主及昆虫媒介，对进口动

物及其产品的监控等等。4.当地对传染病的有效治疗措施，包括被动免疫，采用的抗菌素和相应的药物治疗等。不可忽视耐药菌株出现的可能性。Page▪87中国对病原体危害性分级危险级别危害程度第1类病原体实验室感染机会多，感染

后发病的可能性大，症状重并可危及人员生命，缺乏有效的预防措施；传染性强，对人群危害性大的烈性传染病，包括国内未发现的或虽已发现，但无有效防治的传染病病原体第2类病原体实验室感染机会多，感染后症状较重，可危及人员生命，发病后不易治

疗，对人群危害较大的传染病的病原体。第3类病原体具一般危害性，能引起实验室感染机会较少，在一般微生物学实验室中采用一般措施能控制感染和传播，或有对之有效的免疫预防的病原体。第4类病原体可用于制造生物制品的各种减毒、弱毒及不属于第1、第2和第3类的各种低致病微生物。Page

▪88生物安全实验操作的要求生物安全水平实验操作安全设备设施1常规微生物学操作无特殊需要基础实验室2执行上述操作外，还需要：穿实验服，戴手套口罩全部污染废弃物均需灭菌标注生物危害标志易产生气溶胶的实验操作需使用Ⅰ级或Ⅱ级生

物超净工作台。基础实验室制定进入实验室规章制度。3执行上述操作外，还需要：穿着专用实验服加强出入管理感染性材料的实验室操作必须在Ⅰ级或Ⅱ级生物超净工作台内进行密封性能较好的安全实验设施4执行上述操作外，还需要：经过更衣室更换专用实验服后进室；离室时须经淋浴。全部废弃物彻底灭菌后排出。全部操作在

Ⅲ级生物超净工作台内进行。或穿着供氧的正压太空服，在Ⅰ级或Ⅱ级生物超净工作台内进行。能彻底密闭的高度安全实验设施。Page▪89Theend