【文档说明】体内药物分析-第三章-生物样品与样品制备课件.ppt，共(102)页，2.863 MB，由小橙橙上传

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1第三章生物样品与样品制备药学院药物分析教研室2【大纲要求】1、掌握生物样品的种类及其特点2、掌握生物样品的各种预处理方法的原理及其应用3第一节生物样品的种类、采集、制备与贮存4一、种类、采集和制备(一)血液(Wholeblood,Plasma,Serum)1、血样采集2、血样制备血

浆的制备血液→含有抗凝剂的试管→混合→2500r／min～3000r／min离心5min→上清液即为血浆。血清的制备血样→室温放置30min到1h→出现血饼→剥去血饼→以2000r/min～3000r/min离心5

min～10min→分取上清液即为血清不能作为作用部位药物浓度的可靠指标当血浆中含有的抗凝剂对药物浓度有干扰时，使用血清样品5肝素的加入：1ml血液/需要肝素0.1～0.2mg，通常不需准确加入，在取血前可取少量肝素

钠溶液（1～2滴）置于试管内，旋转试管，使肝素溶液均匀分布于试管壁上，干燥后加入血样后立即轻轻振摇即可。6全血：血液置于抗凝管中，不经离心操作，冷冻储存或直接分析需要测定分布于血细胞内、外的药物浓度如果血浆内

药物浓度波动较大并难以控制血浆药物浓度很低凝影响测定血样的特点：缺点：损伤性采样方式、样品量受限、抽血比较麻烦优点：可用于药物动力学、生物利用度、临床治疗药物监测大多数测定的时原型药物总量7(二)尿液1、尿药测定用途

：药物剂量回收研究、药物尿清除率、生物利用度、判断患者用药是否遵医嘱、预测药物的代谢过程和代谢类型2、尿的采集：非损伤性采样方式、药物浓度较高、收集量较大、收集方便，易受食物、饮水等影响。3、尿样的保存与处理：8(三)唾液1、唾液的采集：漱口后15min进行，采

集时间为10min，采用一些物理或化学方法刺激唾液分泌；（1）缩短采样时间，（2）减小唾液pH变化范围，（3）刺激后得到的唾液其唾液－血浆分布比例的个体差异较小。2、唾液的保存与处理：取样后，除去泡沫，分层后离心，取上清液冻存或直接分析。3、优点：（1）非损伤性取样，（2）可用

于药代动力学研究，（3）不受采血时间和地点限制，（4）样品易收集，病人易接受4、应用：（1）在TDM中的应用根据S/P分类，S/P＜1.0表示药物在唾液中的浓度很低；S/P＝1.0表示适合药物的监测；S/

P不固定表示药物显著转移到了唾液中；S/P很大表示药物的离子化程度很低9组织（1）匀浆化法：组织→加入水或缓冲液→匀浆→上清液（2）沉淀蛋白法：组织→加入蛋白沉淀剂→上清液（3）水解：组织→加入酸或碱→

加热使组织液化→上清液（4）酶水解：组织→加入酶和缓冲液→加热使组织液化→上清液10头发优点：取样方便、无损伤性、检样的掺伪的可能性低、能对某些特定的代谢物进行测定、能了解数月至数年用药的情况、可用于体内微量元素

含量测定、可用于临床用药、滥用药物和毒性药物的检测缺点：样品的预处理繁琐、干扰多、药物的含量低、需要精密仪器11特点：广谱性积累性稳定性依时性相关性指纹性一般在枕部采取样本，国外一般在靠近头皮处剪取，分别于6～10处取10个样本，从根部剪

断，超过12cm的均按照12cm处剪断12头发洗涤1、丙酮－水－丙酮2、丙酮预洗→洗洁精洗涤3、洗衣粉浸泡4、二氯甲烷5、SDS洗涤6、甲醇头发的预洗都需要反复清洗2～3次13毛发样品的制备1、直接甲醇

提取2、酸水解3、碱水解4、酶水解5、超临界流体萃取6、有机破坏14二、生物样品的贮存与处理（一）冷藏或冷冻1、血浆和血清：采血后及时分离（2h），短期4℃，长期-20℃2、尿样：应立即测定，否则需加防腐剂置

冰箱保存3、唾液：在4℃下保存，往往需要在取样时测定pH值4、生物样品总的原则：临时解冻，解冻的样品一次测完，不能反复冷冻→解冻→冷冻(FTC)；样品应以小体积分装存放。15第二节生物样品的预处理与制备16一、预处理目的（一）药物从缀合物中释放，测定总浓度（二）纯化、富集药物（

三）适应和满足测定方法要求的灵敏度（四）防止对分析仪器的污染和劣化17二、样品制备时应考虑的问题（一）药物的理化性质、存在形式和浓度范围（二）药物测定的目的（三）生物样品种类和杂质干扰类型（四）样品的化学组成（

五）药物的蛋白结合率（六）被测组分在预处理过程中的稳定性（七）样品在收集、储存等过程中容器的污染（八）样品的预处理过程要求简便（九）预处理的最后一步应富集被测组分（十）对分析方法的要求1819三、样品的预处理技术（一）经有机破坏的方法1、湿法破坏2、干法破坏硝酸－高氯酸法高温电阻炉灰化法电热

消化器法低温等离子灰化法电热板消化法烘箱消化法3、氧瓶燃烧法20（二）去除蛋白质1、溶剂解法常用溶剂（与水相混溶的有机溶剂）：乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃体积比：1：1～390％去除方法：超速离心（10000r/min）2122（二）去除蛋白质2、

加入中性盐常用中性盐（置换蛋白结合的水，使蛋白脱水而沉淀）：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐、枸橼酸盐比例：1：290％去除方法：超速离心（10000r/min）23（二）去除蛋白质3、加入强酸常用溶剂（与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀）：10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸－钨酸混合

液、5％偏磷酸体积比：1：0.690％去除方法：超速离心（10000r/min）2425其他去除蛋白的一些方法1、加入含锌盐及铜盐的沉淀剂2、超滤法3、酶水解法4、加热法26（三）分离、纯化与浓集1、液－液提取法（

LLE）2、固相萃取（SPE）3、自动化SPE技术4、固相微萃取（SPME）5、膜萃取（ME）6、微透析技术（MD）7、超临界流体萃取（SFE）271、液－液提取法（LLE）大多数药物都是脂溶性的，内源性物质基本上都是水溶性的，当用有机溶剂萃取时，药物被萃取出来而内源性物质被除去，因

此采用有机溶剂萃取法能够达到纯化的目的。28关键要考虑三个方面的因素：（1）有机溶剂的特性（2）有机溶剂相和水相的体积（3）水相的pH值29选择溶剂应注意的问题：（1）了解药物与溶剂的化学结构及性质，根据相似相溶来选择（2）要求对分子型药物易溶，离子型药物不溶（3）沸

点低、易挥发和浓缩（4）要与水不相溶（5）无毒、不易燃（6）不易乳化（7）具有较高的化学稳定性和惰性（8）不影响检测溶剂的选择与纯度要求302、有机相和水相的体积：一般为1:1～1:23、水相的pH值：碱性药物→pH>pKa+1～2酸性药物→pH＜pKa+1～24、提取次数：往往进行的是一次萃

取，个别情况下可以对分离出的含药有机相用一定的pH水进行反萃取（Backextraction)31优点：选择性；药物能与多数内源性物质分离缺点：乳化、有毒、不环保、不自动，对极性大的化合物的萃取效率低总的流程图：血浆或其他生物样品加入萃取溶剂分取

有机层必要时调pH值减压氮气吹干流动相溶解后进样分析32消除LLE中产生的乳化现象：1、提取前在水相中加入适量的固体食盐2、经适当转速离心消除已产生的轻微乳化3、置于冰箱中快速冻凝破坏乳化层，再融化后离心来消除已产生的严重乳化现象33LLE的两种特殊萃取方

法：离子对提取法（Ion-pairextraction)提取烷基法（Extractivealkylation）离子对提取法：是一种用有机溶剂提取离子型药物的方法。原理：一些酸性或碱性的有机药物在体液中呈离子状态，成为强亲水性的带电荷离子，不易被提取出来。当加入与药物呈相反电荷的反离子物质时，即

可成为具有一定脂溶性的离子对，用有机溶剂可萃取出来。34碱性药物：庚烷磺酸、辛烷磺酸、己烷磺酸等酸性药物：四丁基铵、四乙基铵、四辛基铵提取溶剂：氯仿、二氯甲烷352、固相萃取(Solidphaseextract

ion,SPE)（1）原理根据液相萃取的原理，利用液相中溶质与吸附剂间的选择性吸附与洗脱原理。当液相流经吸附剂后，一些小分子药物被吸附，经适当洗涤除去杂质，再用少量溶剂洗脱，可达到分离、纯化目的。决定因素：药物与固定相表面的活性基团、药物与溶剂分子间的分子间作用

力36洗脱方式：（1）药物与固定相的亲和力>杂质与固定相的亲和力－先被保留后解吸（2）药物与固定相的亲和力<杂质与固定相的亲和力－直接洗脱37可弃性柱、操作步骤少、使用溶剂少、节省实验费用和时间38（2）

SPE固相选择的原则－固定相与被测组分应具有相似的极性，含有被测组分的样品应使用极性相反的溶剂溶解后上柱，而用与被测组分相似极性的溶剂洗脱Ⅰ→亲脂性键合相硅胶（C18、反相硅胶）Ⅱ→大孔吸附树脂（苯乙烯与二乙烯苯共聚物）Ⅲ→离子交换树脂Ⅳ→亲水型填料（硅藻土、正

向硅胶）3940（3）SPE方法建立－以亲脂性键合硅胶为例1、以甲醇润湿小柱，活化填料，甲醇含量8％2、用水或缓冲液冲洗小柱，洗去多余的甲醇3、上样，弃去废液4、用水或缓冲液冲洗小柱除去水溶性杂质5、用合适的洗脱剂洗脱小柱，收集洗脱物

6、回收溶剂后进行分析和监测41实验中的注意事项1、体液样品可直接上柱，上样体积在0.1～2.0ml2、洗脱流速在1～2ml/min3、萃取介质中含有少量的甲醇可以提高萃取率4、萃取碱性药物时，常需在洗脱机中加酸、有机胺、醋酸铵或离子对试剂5、选用苯基和氰基柱时，需用

极性溶剂如丙酮洗脱6、选用反相硅胶柱时，少量的甲醇和乙腈即可完成洗脱42Ⅱ：大孔吸附树脂特点：具有较大的比表面积、吸附容量大、可反复使用、价格便宜、最常用的是非极性、一般用乙醇－水或甲醇－水即可解吸待测物质、加入适量的无机盐有助于吸附预处理：用乙醇浸泡除去杂

质（或用酸碱泡），并使其充分溶涨，在用水洗去有机溶剂后使用。注意事项：树脂要保持湿润43Ⅲ：离子交换树脂1、对弱酸性药物→在中性或碱性条件下用阴离子交换法萃取→用水或甲醇清洗→酸性溶液洗脱2、对碱性药物→在中性或酸性条件下用阳离子交换法萃取→用水或

甲醇清洗→碱性溶液洗脱离子交换树脂适用于高极性和可电离性药物的纯化44Ⅳ：亲水性填料原理：分配作用，水基质样品分布于填料表面为固定相，流动相为与水不相混溶的有机溶剂，较为亲脂的药物从固定相转移到流动相就完成了萃取，与LLE雷同。操作：上样到亲水性固定相表面→用与水不相混溶的有

机溶剂洗脱目标化合物→强亲水的蛋白质等保留在固定相上。注意事项：1、硅胶填料→先用甲醇和水处理后上样2、硅藻土/棉纤维→直接上样，不需清洗并可再生3、样品萃取无浓集作用，萃取体积大，样品较干净45萃取方法的选择1、亲脂性药物→LLE、反相硅胶、大孔吸附树脂、亲水性填

料2、碱性药物（亲脂性）→大孔吸附树脂3、亲水性强可离解的药物→离子交换树脂4、亲水性强不可离解的药物→沉淀蛋白后进样46（4）各萃取方法之间的比较SPE方法间的比较47SPE方法的优点：1、引入的杂质少2、可以完全避免乳化的形成3、有较高的

萃取回收率，重现性好4、小柱可弃，没有污染5、需要的样品量少6、洗脱溶剂多为水溶性的，易于实现自动化48SPE的缺点：1、价格昂贵2、技术要求高3、小柱各批之间有差异4、主子容易堵塞，影响分离效果49SPE与LLE即沉淀蛋白的比较1、SP

E萃取时间短，可自动化2、LLE萃取达平衡的时间较长3、二者在萃取回收率即选择性等方面，因药物与萃取条件而变，不好比较4、沉淀蛋白法简便、快速、回收率高，但不适合于含量低的样品5、三种方法得到的都是药物的总量3、自动化SPE技术50自动化SPE技术的优点和缺点（1）节约时间（2）

平行操作带来了高的工作效率（3）减少了操作误差，提高准确度和精确度（4）安全性好优点缺点（1）残留物对测定有干扰（2）要考虑样品的物理或化学性质的稳定性对样品测定的影响51自动化设备在线技术（On-linetechnique)独立柱工作站（Discretec

olumnworkstation)96通道工作站（96-wellstations）52在线提取技术（1）限制性介质填料（RestrictedaccessmediaRAM）（2）湍流色谱（Turbulentflowchromatography（3）在线固相萃取技术53限制性介质

填料：是一种直接进样预处理技术，通过控制硅胶微粒孔径的大小及表面结构来分离待测药物。由亲水性的外表面和疏水性的内表面构成的孔径适宜的硅胶颗粒，大分子不能进入孔的内部，不能在柱上保留。54湍流色谱：是一种直接进样

预处理技术，采用5～10ml/min的高流速，形成非线性的液流，加快待测物在吸附剂上的分布速度，使得大分子的生物基质成分与小分子药物得到良好分离在线固相萃取技术：是应用最广泛的一种预处理技术，常与HPLC和LC-MS/

MS联用5556NFOHOHCOONaFluvastatin57BlankplasmaPlasmaspikedwithstandardPlasmaobtainedafteroraladministration58自动处理108个样品，同时平行进行四个样品的固相萃取高处理量，适合LC-MS

及GC使用1ml和3ml、6ml标准SPE柱处理后的样品可转移至普通试管、密封的标准2ml自动进样瓶以及96孔反应板可在4—40℃范围控制温度可进行双柱串联的自动固相萃取59自动化SPE方法的建立（1）柱预处理：除去填料中的杂质，使填料溶剂化，提高重现性（2）加样：注意样品

溶剂强度不宜过高、样品体积要小（3）除杂：用中等强度的清洗溶剂洗脱干扰组分，不影响待测组分的保留（4）待测物的洗脱和分析：用解析溶剂完全洗脱待测物60自动化SPE方法学评价（1）样品回收率（2）精密度（3）灵敏度61Sensitiveliquidchromatography–ta

ndemmassspectrometrymethodforthedeterminationofscutellarininhumanplasma:Applicationtoapharmacokineticstudy62

634、固相微萃取法（Solid-phasemicro-extractionSPME）最先由加拿大Waterloo大学的Pawliszyn教授的研究小组于1990年首次进行开发研究,属于非溶剂型选择性萃取法。SPME已

由美国的Supelco公司在1994年实现商品化64（1）装置65（2）方法萃取过程:将萃取器针头插入样品瓶内→使具有吸附涂层的萃取纤维进行萃取→拉起活塞→拔出针头Direct-SPME:是将纤维直接插入样品溶

液中进行萃取,达到分配平衡后即可取出进行色谱分析。Headspace-SPME:不是直接将纤维插入溶液中而是在液上进行顶空萃取,不与样品接触，可避免基体干扰和提高分析速度。6667解吸过程SPME–GC解吸方式通常为热解吸

，解吸温度一般为150℃～250℃，气相的载气流也有助于解吸。整个过程实现了无溶剂化，提高了柱效，减轻了环境污染。在SPME–HPLC中，通常要采用六通阀装置，使待测物在适当的溶剂中解吸（称之为溶剂解吸），并将待测物带入检测器。选择适当的洗脱剂和洗脱时间可避免峰展宽。

68VVKVCVKnssss+=101原理：n＝萃取涂层中所吸附的待测物的量Ks1＝待测物在涂层和样品基质间的分配系数Vs＝萃取头固定相液膜的体积V＝样品溶液的体积C0＝待测物浓度当V远大于Ks1Vs时01CVKnss=萃取头固定相的类型、增加纤维长度和涂

层厚度69SPME的影响因素：（1）纤维涂层－相似相容原理（极性涂层萃取极性化合物、非极性涂层萃取非极性化合物），小分子和挥发性物质（100μm），大分子或半挥发性物质（7μm）聚二甲基硅氧烷（PDMS）－非极性涂层聚丙烯酸酯（

PARL）－极性涂层结合方式：非键合、键合、部分交联三者在有机溶剂中的稳定性：键合相>部分交联>非键合相70（2）萃取时间：不要求达到完全的萃取或平衡，萃取时间一般为5～20min，应保持采样时间、温度和纤维侵入的深度等条件

一致（3）涂层厚度及其性质：涂层厚有利于提高方法灵敏度、适合于挥发性物质的保留、吸附速度慢、达平衡时间长、分析速度慢（4）盐的作用和pH的影响：水溶液中离子强度增大，提高分析灵敏度，样品液的pH值应与涂层的一致（5）搅拌的影响：可提高分析灵敏度，机械搅拌效率高（6）温

度的影响：升高温度缩短平衡时间，加快分析速度，但会使待测物的分配系数减小，不利于分配71（5）联用技术72SPME在体内药物分析中的应用：优点：操作时间短，样品量小，无萃取溶剂，重现性好，选择性高，适合于极性和非极性化合物的样品前处理，集采样、萃取、浓集、进样于

一体，避免过多的操作误差，还可与GC、HPLC等仪器联用。展望：发展高选择性和高效涂层的新型填料，使分析对象扩展到无机物的分析735、膜萃取（Membranceextraction)（1）原理：膜是两相

间的选择性屏障，在膜两侧施加一定的动力时，物质就会从一侧迁移到另一测。分子足够小，能通过膜，大分子则不能通过膜。浓度梯度－导致分子迁移电位梯度－导致电荷迁移压力梯度－导致气体或松密度液体迁移材料：聚丙烯、纤

维素、人造膜、生物屏障74（2）膜的几种萃取方法1、微粒填料薄膜（Particle-loadedmembrancePLM）：是由各种不同的固定相填料填充于薄膜介质中构成的，C8、C18、SDB等，多孔网状聚四氟乙烯、聚氯乙烯等，厚度约为0.55m

m。优点：提取效率高，单位体积的提取容量大，洗脱溶剂用量小，提高分析灵敏度，可多层堆叠，提高分析容量和选择性，不同的填料可同时堆叠，可同时富集不同类型和酸碱性的化合物。注意事项：样品液应先经过0.1～0.2μm的滤膜过滤，防止堵塞，加样

前需用少量甲醇润湿752、支持液膜萃取（SupportedliquidmembranceextractionSLME）采用一层渗透性聚四氟乙烯膜分开两种溶液，薄膜中的微孔由溶剂饱和后固定在两个扁平的模块之间，呈现上下两水相层，中间有机层的“三明治”三相萃取系统，即“液液萃取－透析－液液萃取”

三步的结合。一般来说，待测物在样品中呈离子状态与另一试剂形成非离子状态，被有机膜萃取厚扩散进入接受相，完成萃取过程。适用于强极性化合物，非极性和无法离子化的药物不能选用该法763、微孔滤膜液液萃取（Microporousmembranc

eliquid-liquidextractionMMLLE）基本原理同支持液膜萃取，将“三明治式”改为两相萃取，用一张疏水性膜将水相与有机相隔开，水相流速快而有机相流速慢，适合于微量弱极性化合物的富集和纯化。77膜萃取的特点：不仅可以实现样品的分

离、高选择性、有机溶剂用量小，可以与GC在线联用，易于实现自动化影响因素：样品液的流速联用技术：可与LC、GC、CE联用展望：商品化的膜分离设备的出现786、微透析技术（MicrodialysisMD）是

一种膜分离技术，它是利用膜透析原理，微量地对细胞液进行流动性连续采样的新型采样和色谱样品制备技术；也可解释为是一种在不破坏生物体内环境的前提下，对生物体细胞液的内源性或外源性物质进行连续取样和分析的新技术。可进行原位分析（Insiteanalysis）79原理：将由膜制成的微透析

探针植于需要取样的部位，用与细胞间液相接近的生理溶液在0.5～5μl/min的流速灌注探针，由膜内外的浓度差使体内待测组分被灌注液带到体外，进行分析。装置：微透析探针、并可与CE和微柱HPLC联用80微透析技术的特点：1、可连续跟

踪体内多种化合物的量随时间的变化－时间分辨性2、空间分辨性－可真实代表取样点化合物的浓度，在不同部位取样，可以知道药物的分布3、可以直接提取出不含大分子的小分子药物4、样品不经处理可直接测定5、在药物代谢中，不需处死动物和制备匀浆，可完整提供每只动

物的浓度－时间曲线，减少实验动物数，不破坏机体完整性，可维持实际的生理条件。81微透析技术的分析方法：1、对分析方法的要求：高灵敏度、样品量少、分析速度快2、微透析与HPLC在线联用：反相或离子交换LC3、微透析与HPCE在线联用：需要利用一种缓冲液将背景电介质稀释后进样分析82微透

析技术的应用：1、药物代谢动力学的研究：外周（皮肤、脂肪组织）、血液、胆汁、肝脏、肾脏、眼睛、骨骼肌等2、研究药物向中枢神经系统的分布3、药物与蛋白的结合研究837、超临界流体萃取（SupercriticalfluidextractionSFE）基本概念1、超临界流体（SF）－是指处

于临界温度和临界压力以上，介于气体和液体之间的流体。氨、乙烷、庚烷、一氧化亚氮、二氧化碳，具有液体和气体的双重特点，具有与液体相似的密度和溶解能力，具有与气体形似的黏度选择C02为SF的原因：具有较低的临界温度

（31℃）和临界压力（7390kPa）、惰性、无毒、无味、无色、不易燃、价格低廉2、超临界流体萃取：是指利用超临界状态下的气体作为萃取介质进行药物萃取的一种方法84超临界流体C02的溶解能力：非极性或低极性化合物，入挥发油、酯、醚、内酯等。中等极性或大极性的化合物在较低的萃取压力下不能

被萃取，往往需要加入Modifier。85超临界流体萃取的影响因素1、温度－温度高利于萃取，但要考虑样品的稳定性2、萃取压力－高的萃取压力利于萃取，但应考虑仪器的性能3、改性剂－加入少量的改性剂利于极性化合物的萃取，加入量不超过20％，一般为1～5％4、萃取时间－萃取时间长可提高萃取率，但要

考虑样品的稳定性86JournalofChromatographyA,1083(2005)52–5787888990919293SFE的萃取过程：待测物从基质种释放出来，进入超临界流体中→待测物从萃取器转移到收集系统→降低超临界流体的压力，使待测物释放出来萃取釜和解析釜949596SFE在处理生物

样本时具有以下优点：1、回收率高－不易形成乳化，并且流体易进入组织内部进行萃取2、分析速度快－dynamicextraction3、适用范围广泛4、易于和其他分析仪器联用5、减少了对环境的污染97一些联用技术SFE-HPLCSF

E-FTIRSFE-NMRSFE-MSSFE-SFCSFE-GC98四：络合物的水解药物及其代谢产物与体内的内源性物质结合生成的产物叫作络合物水解法酸水解法－浓盐酸酶水解法－UDPGT或硫酸酯酶溶剂解法－在溶剂萃取过程中被萃取的方法99五、化学衍生化（1）光

谱分析法UV－对一些没有紫外吸收的化合物，使其与紫外衍生化试剂反应生成具有紫外吸收的衍生物FD-对不具有荧光的化合物，利用其与荧光试剂反应生成具有荧光的衍生物（2）色谱分析法GC-使极性药物变成非极性的和易于挥发的药物，增加药物的稳定性，提高对光学异构体的分离能力。烷基化、酰化、

硅烷化、手性衍生化－P105表3－10100HPLC－提高对样品的检测灵敏度、改善复杂样品的分离度、适合于结构分析需满足的要求：1、反应条件简单温和，并且能迅速定量地进行2、往往只生成一种衍生物，所得副产物不干扰测定3、衍生化试剂易于获得，

价格便宜101几种基本的HPLC衍生化类型1、紫外衍生化反应2、荧光衍生化反应3、电化学衍生化反应：药物与某些试剂反应生成具有电化学活性的衍生物，入带有硝基的衍生化试剂4、手性衍生化反应102第三章复习题1、常见的生物样本有哪些？如何制备和采

集？2、生物样品中除去蛋白的方法有哪些？3、生物样品分析中常见的分离与纯化技术有哪些？各有何特点？4、简述SPE的实验操作过程及其优点？5、SPME的萃取中有哪些影响因素？6、简述膜萃取的几种方法及特点？7、简述SFE及其影响因素？8、注意各英文

名词解释。